特异性引物PCR鉴定鸡球虫种类与卵囊纯度的研究

作     者：王鑫 韩红玉 黄兵 姜连连 赵其平 董辉 韩静芳 WANG Xin;HAN Hong-Yu;HUANG Bing;JIANG Lian-Lian;ZHAO Qi-Ping;DONG Hui;HAN Jing-Fang

作者机构：中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241 聊城大学材料科学与工程学院山东聊城252059 

基　　金：国家科技基础条件平台建设项目(2005DKA21104) 

出 版 物：《寄生虫与医学昆虫学报》 (Acta Parasitologica et Medica Entomologica Sinica)

年 卷 期：2010年第17卷第4期

页      码：203-207页

摘      要：为了建立鸡球虫种类的快速分子生物学鉴定方法,检测实验室保存虫株受污染状况,分别对单卵囊分离繁殖及实验室长期传代保存的6株巨型艾美耳球虫（EMSH01、EM4101、EMES01、EMBA01、EMTY01和EMTO01）、4株柔嫩艾美耳球虫（ETDS01、ETGD01、ETAD和ETAM）、1株堆形艾美耳球虫（EA1201）、1株变位艾美耳球虫（EMIS01）、1株毒害艾美耳球虫（ENGD01）收集卵囊,纯化、提取总DNA,根据巨型艾美耳球虫、柔嫩艾美耳球虫、堆形艾美耳球虫的RAPD和SCAR分子标记、ITS-1区序列分别设计Tn-F与Tn-R、Mx-F与Mx-R、Ac-F与Ac-R、ET-1与ET-2、EM-1与EM-2、EA-1与EA-2等6对特异性引物,对13个虫株分别进行PCR扩增,1%琼脂糖电泳分析片段大小.结果显示：用引物Tn-F与Tn-R、ET-1与ET-2对ETDS01、ETGD01、ETAD、ETAM、EMTO01扩增出特异性条带,其余4种8个虫株未见条带;用引物Mx-F与Mx-R、EM-1与EM-2对EMSH01、EM4101、EMES01、EMBA01、EMTY01和EMTO01扩增出特异性条带,其余4种7个虫株未见条带;用引物Ac-F与Ac-R、EA-1与EA-2对EA1201扩增出特异性条带,其余4种12个虫株未见条带.结果说明特异性引物PCR方法鉴定的5种球虫与原常规生物学方法鉴定的结果一致,检测出保存的巨型艾美耳球虫EMTO01虫株受柔嫩艾美耳球虫污染,其余虫株未发现交叉污染.研究证明利用特异性引物建立的PCR方法可用于鸡球虫种类与卵囊纯度的鉴定.

主 题 词：鸡 球虫 艾美耳球虫 特异性引物 PCR 鉴定 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-0507.2010.04.003

馆 藏 号：203108740...