TMV、CMV双价抗性RNA沉默表达载体的构建

作     者：陈瑜欣 高玉龙 丁灿 徐照丽 Chen Yuxin;Gao Yulong;Ding Can;Xu Zhaoli

作者机构：云南农业大学农学院昆明625014 云南省烟草农业科学研究院云南玉溪653100 

基　　金：中国烟草总公司云南省公司科技计划项目"烟草主要病害的转基因研究"(07A03) 

出 版 物：《中国农学通报》 (Chinese Agricultural Science Bulletin)

年 卷 期：2011年第27卷第5期

页      码：317-321页

摘      要：本研究以在植物体内转录出RNA沉默的高效诱导因子双链RNA(dsRNA)为目标,根据已报道的TMVΔMP和CMVΔRep的核苷酸序列设计特异性引物,分别从质粒pBIN-TMVΔMP(i/r)、pBIN-CMVΔRep(i/r)扩增MP基因、Rep基因,并在pGEM-TEasy载体上将2片段串联起来,再用PCR扩增串联好的正反向MP-Rep基因。正向MP-Rep基因用BamHI和KpnI切下,将所得基因片段与用同样酶切开的含内含子的pKAN-In相连,取名+pKAN;用同样的方法,将反向MP-Rep基因用XbaI切下,将所得基因片段与用同样酶切开的+pKAN相连,取名pKAN-In-MP-Rep,再用NotI将包括Intron和正反向MP-Rep基因在内的片段切下,将其定向插入同样酶切开的pART27上,获得重组质粒pART27-In-MP-Rep。获得的载体可以应用于植物转基因抗病毒育种工程中。

主 题 词：RNA沉默载体 烟草花叶病毒 黄瓜花叶病毒 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

馆 藏 号：203108747...