非洲猪瘟病毒pH359L蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

作     者：杨赛霞 赵亚茹 刘志杰 杨吉飞 张忠辉 樊洁 耿抒贤 吕欣倩 敬梦瑶 殷宏 牛庆丽 YANG Saixia;ZHAO Yaru;LIU Zhijie;YANG Jifei;ZHANG Zhonghui;FAN Jie;GENG Shuxian;LYU Xinqian;JING Mengyao;YIN Hong;NIU Qingli

作者机构：国家非洲猪瘟区域实验室(兰州)/中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 

基　　金：国家自然科学基金面上资助项目(32072830) 甘肃省重大专项资助项目(20ZD7NA006) 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室自主课题资助项目(SKLVEB2020CGPY02) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2022年第42卷第3期

页      码：432-438页

摘      要：为制备抗非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV) pH359L蛋白的多克隆抗体,本研究以GenBank登录的ASFV HLJ/18毒株基因序列设计H359L基因的特异性引物,扩增H359L基因并构建pET-28a-H359L原核表达质粒,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达和镍柱亲和层析纯化蛋白后,免疫新西兰大白兔制备抗pH359L蛋白的多克隆抗体,通过Western blot和IFA试验对制备的抗体反应性进行测定。结果表明,构建的pET-28a-H359L重组质粒无点突变;重组蛋白pH359L在37℃以0.1 mmol/L的IPTG诱导表达量最高,其相对分子质量约为43.0 kDa,与预期大小一致;蛋白以包涵体形式表达;抗pH359L多克隆抗体效价达到1∶512 000;Western blot和IFA结果显示,制备的多克隆抗体能够特异性识别ASFV感染猪肺泡巨噬细胞表达的天然pH359L蛋白。本研究为揭示ASFV pH359L蛋白的功能及ASFV相关的转录机制奠定基础。

主 题 词：非洲猪瘟病毒 pH359L 原核表达 多克隆抗体 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2022.03.04

馆 藏 号：203108760...