新型鹅星状病毒荧光定量PCR方法的建立及应用

作     者：马水锋 徐梦璐 吴少鹏 邵红霞 钱琨 万志敏 叶建强 秦爱建 MA Shuifeng;XU Menglu;WU Shaopeng;SHAO Hongxia;QIAN Kun;WAN Zhimin;YE Jianqiang;QIN Aijian

作者机构：扬州大学兽医学院教育部禽类预防医学重点实验室江苏扬州225009 扬州大学兽医学院江苏省动物预防医学重点实验室江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009 

基　　金：国家重点研发计划(2016YFD0500803、2017YFD0500802) 

出 版 物：《中国家禽》 (China Poultry)

年 卷 期：2022年第44卷第2期

页      码：36-42页

摘      要：为建立一种准确快速检测新型鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAstV)的方法,研究以GAstV毒株JS20为模板,根据GAstV的ORF2基因序列设计特异性引物,在构建重组质粒pGEMT-GAstV的基础上,建立了检测GAstV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法。结果显示:阳性对照重组质粒pGEMT-GAstV在1.087×10^(1)~1.087×10^(8)拷贝/μL浓度之间与qRT-PCR的Ct值呈现良好的线性关系;该qRT-PCR对所检测的鸡星状病毒(cASTV)、禽腺病毒(FAdV)、小鹅瘟病毒(GPV)以及鸭坦布苏病毒(DTMUV)均无交叉反应;检测灵敏度为1.087×10^(1)拷贝/μL,组内和组间变异系数均小于1.6%。利用该q RT-PCR方法对在鹅胚及LMH细胞上繁殖不同代次的JS20病毒载量进行检测发现,JS20在鹅胚上的扩增效率更高,病毒载量可达10^(8)~10^(9)拷贝/mL。对江苏不同地区26份临床样品进行检测发现,该q RT-PCR方法的阳性检出率为73.08%,而普通PCR方法阳性检出率仅为42.30%。结果表明建立的新型GAstV qRT-PCR具有很好的特异性及灵敏度,且在新型GAstV定量分析及临床样品检测诊断中展示了良好的应用前景。

主 题 词：新型鹅星状病毒 荧光定量PCR 特异性 灵敏度 临床诊断 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16372/j.issn.1004-6364.2022.02.006

馆 藏 号：203108857...