玉米C_4型PEPC全长基因的克隆与表达载体构建

作     者：王雷 崔震海 张立军 

作者机构：沈阳农业大学生物科学技术学院/辽宁省植物基因工程技术研究中心辽宁沈阳110866 

基　　金：国家自然科学基金(编号:31000673) 教育部博士点基金(编号:20102103110001 20102103120001) 辽宁省科技厅科技攻关项目(编号:201201238) 

出 版 物：《江苏农业科学》 (Jiangsu Agricultural Sciences)

年 卷 期：2014年第42卷第11期

页      码：26-29页

摘      要：以玉米自交系郑58基因组DNA为模板,设计了2对特异性引物,分别PCR扩增玉米C4型磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)启动子及其全长编码序列,利用In-Fusion技术将两者定向克隆到载体p CAMBIA-1391Z上,并对重组子进行测序验证。结果表明,该PEPC启动子序列与Gen Bank中的玉米自交系B73的同源性为97.70%,片段长1 200 bp;全长编码序列同源性为97.90%,片段长6 330 bp。通过HindⅢ和EcoRⅠ酶切载体p CAMBIA-1391Z,利用In-Fusion技术将线性载体与之前获得的2个PCR片段连接,测序结果与预期序列一致,表明成功构建了p CAMBIA-1391Z-PEPC植物表达载体。对克隆和载体构建中存在的问题进行了讨论,以期为该类型基因的高效克隆及表达载体的构建提供参考、为C4型PEPC基因功能研究和C3植物遗传转化提供可用的基因序列。

主 题 词：玉米 PEPC 基因克隆 序列分析 表达载体构建 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.15889/j.issn.1002-1302.2014.11.007

馆 藏 号：203108934...