犬腺病毒、犬细小病毒联合PCR方法的建立与应用

作     者：王雷 夏咸柱 卫广森 扈荣良 刘维全 邹啸环 黄耕 

作者机构：中国人民解放军军需大学吉林长春130062 辽宁省益康生物制品厂辽宁辽阳111000 

基　　金：全军医学科学研究"十五"计划重点课题(01-Z-092) 

出 版 物：《病毒学报》 (Chinese Journal of Virology)

年 卷 期：2003年第19卷第3期

页      码：262-266页

摘      要：根据GenBank报道的犬腺病毒(CAV)和犬细小病毒(CPV)序列,设计两对联合PCR引物,其中一对为CAV-1和CAV-2通用引物,另一对为CPV引物。在建立单项PCR基础上,通过优化Mg2+离子浓度和循环参数等反应条件建立联合PCR,确定联合PCR条件为:96℃180s,96℃30s,56℃30s,72℃80s,30个循环。联合PCR结果显示:CAV-1扩增片段大小为497bp,CAV-2为1019bp,CPV为719bp;细胞和其它相关病毒对照均无扩增带。上述PCR产物经用限制性内切酶酶切和克隆测序,结果均与相应病毒的应有条带和序列相同。敏感性比较试验结果表明,联合PCR比用细胞培养分离病毒敏感。将联合PCR应用于15份CAV和CPV细胞培养物,5份CAV-1、1份CAV-2和3份CPV人工感染犬病料以及30份临床病料检测,并与电镜负染、HA/HI及病毒分离等方法的结果进行比较,结果显示,联合PCR的检出率和病毒分离结果一致,高于电镜负染和HA/HI试验。以上结果说明:CAV-1/CAV-2和CPV联合PCR不仅具有很好的特异性和敏感性,而且可以在短时间内(2 5h～3h)同时鉴定出上述三种病毒,因此具有良好的实验室诊断和临床应用价值。

主 题 词：犬腺病毒 犬细小病毒 联合PCR方法 实验室诊断 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-8721.2003.03.015

馆 藏 号：203109173...