膜联蛋白Ⅱ基因短发夹RNA表达载体的构建和鉴定

作     者：刘亚伟 戴兵 梅长林 付莉莉 蔡厚安 LIU Ya-wei;DAI Bing;MEI Chang-lin;FU Li-li;CAI Hou-an

作者机构：第二军医大学长征医院肾内科解放军肾脏病研究所上海200003 

基　　金：国家自然科学基金重点项目(30330640) 国家自然科学基金面上项目(30271523) 国家自然科学基金(30576867)~~ 

出 版 物：《第二军医大学学报》 (Academic Journal of Second Military Medical University)

年 卷 期：2006年第27卷第11期

页      码：1181-1185页

摘      要：目的:构建针对膜联蛋白(annexin)Ⅱ的短发夹RNA(shRNA)的表达载体,观察其对目的基因表达的影响。方法:根据GenBank中annexinⅡ基因已知序列设计了2条序列,即annexinⅡshRNA1、annexinⅡshRNA2,同时设计1条非特异性序列作为阴性对照。据此设计合成各自的寡核苷酸链,退火后连接人pGenesil1载体,转化扩增后进行序列测定。3种重组表达载体均转染HEK293细胞,通过实时荧光定量RT-PCR和Western印迹法分别在基因和蛋白水平上检测各自annexinⅡ的表达,以未转染细胞作为空白对照。结果:3种重组表达载体(pGenesil1-annexinⅡshRNA1、pGenesil1-annexinⅡshRNA2和pGenesil1-negative shRNA)经限制性酶切及测序分析证明基因插入正确。转染HEK293细胞后,转染pGenesil1-annexinⅡshRNA2组细胞annexinⅡ基因和蛋白表达明显低于转染pGenesil1-annexinⅡshRNA1、pGenesil1-negative shRNA以及空转染细胞(P<0.05),而后三者间没有明显差异。结论:成功构建了针对annexinⅡ的shRNA表达载体(pGenesil1-annexinⅡshR-NA2),转染细胞后可抑制annexinⅡ基因表达。

主 题 词：膜联蛋白质类 RNA干扰 短发夹RNA 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:0258-879X.2006.11.007

馆 藏 号：203109380...