应用PCR-RFLP技术检测乙型肝炎病毒变异rtI233V

作     者：郭红英 李新艳 毛日成 尹有宽 张继明 GUO Hong-ying;LI Xin-yan;MAO Ri-cheng;YIN You-kuan;ZHANG Ji-ming

作者机构：复旦大学附属华山医院感染病科上海200040 

基　　金：863重大专项子课题(2006AA02A411) 上海市科委基础研究重点课题(07JC14009) 国家自然科学基金资助项目(30872242) 

出 版 物：《世界临床药物》 (World Clinical Drug)

年 卷 期：2009年第30卷第3期

页      码：162-165页

摘      要：目的建立一种应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术检测乙型肝炎病毒(HBV)变异rtI233V的方法。方法参照GenBank收录的HBV基因逆转录(RT)区序列设计PCR引物,根据HBVRT区rt233位野生型和变异型的序列,分别选择Bst1107I和Bsp1407I两种内切酶。以rtI233V变异株及野毒株质粒为模板进行PCR扩增,PCR产物分别用Bst1107I和Bsp1407I两种限制性内切酶进行酶切,观察酶切产物琼脂糖凝胶电泳条带变化。并以变异型和野生型质粒的不同配比,分析该检测方法的敏感性。结果本研究建立的PCR-RFLP方法可同时检测野毒株和rtI233V变异株。PCR扩增后,野毒株和rtI233V变异株的PCR产物长度均为255bp。以Bst1107I酶切,野毒株质粒的PCR产物可以切成75bp和180bp两段,rtI233V变异株PCR产物的长度保持不变。以Bsp1407I酶切,rtI233V变异株质粒的PCR产物可以切成75bp和180bp两段,野毒株质粒的PCR产物长度保持不变,测序结果与上述结果一致。敏感性检测表明,此方法至少可检出标本中10%的变异株。应用此方法检测100例慢性乙型肝炎患者,筛选出2例rtI233V变异患者。结论应用PCR-RFLP方法可检测rtI233V变异,具有较高的敏感性,可用于HBV变异rtI233V的早期诊断。

主 题 词：乙型肝炎病毒 聚合酶链式反应 限制性片段长度多态性 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 100401[100401] 10[医学] 

馆 藏 号：203109746...