波形蛋白对H9N2亚型AIV复制的影响研究

作     者：卢安然 殷贵虎 黄翔宇 黄静雯 胡嘉宁 蔡怡秦 冯秀丽 LU Anran;YIN Guihu;HUANG Xiangyu;HUANG Jingwen;HU Jianing;CAI Yiqin;FENG Xiuli

作者机构：南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏南京210095 

基　　金：国家重点研发项目(2017YFD0500706) 国家自然科学基金(31872458) 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2022年第54卷第4期

页      码：93-101页

摘      要：为研究波形蛋白(vimentin)对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)复制的影响,构建了真核表达载体FLAG-vimentin,并采用Western blot技术验证FLAG-vimentin重组载体和病毒NP蛋白的表达情况,用荧光定量PCR技术检测病毒HA基因水平。同时,设计合成siRNA,敲低内源性vimentin,检测其对病毒HA基因表达水平的影响。构建原核表达载pCold I-vimentin,蛋白纯化后孵育细胞,采用Western blot、荧光定量PCR技术检测病毒的蛋白表达和基因水平的变化。结果证实,H9N2亚型AIV感染FLAG-vimentin重组载体转染的Hela细胞12 h时,病毒NP蛋白表达减少;而在感染24和36 h时,病毒NP蛋白表达上升。荧光定量PCR结果亦显示,在AIV感染后12 h时,HA基因表达水平明显降低。siRNA敲低Hela细胞内源性vimentin后,H9N2亚型AIV的HA基因表达水平在病毒感染12 h时明显升高,24 h时差异较小,36 h时有所升高。纯化后的vimentin重组蛋白孵育细胞,在病毒感染36 h时,H9N2亚型AIV的NP蛋白表达显著被抑制。荧光定量PCR结果亦证实病毒HA基因在AIV感染后36 h时表达水平明显降低。上述结果表明,H9N2亚型AIV在人源Hela细胞上的早期复制中,vimentin能起到一定程度上的抑制作用,且其重组表达蛋白孵育细胞能够阻断H9N2亚型AIV对细胞的感染,为深入研究vimentin抗病毒复制的机制提供了重要的试验依据,同时为开展抗H9N2亚型AIV的药物研发提供了参考。

主 题 词：波形蛋白 H9N2亚型AIV 重组蛋白表达 病毒基因表达 小干扰RNA 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

馆 藏 号：203109757...