人/猪SERPING1同源性比较及猪SERPING1敲除细胞系的建立

作     者：王蒙 朱晓晗 刘晓蕊 李琳 王盈 杨海元 戴一凡 Wang Meng;Zhu Xiaohan;Liu Xiaorui;Li Lin;Wang Ying;Yang Haiyuan;Dai Yifan

作者机构：南京医科大学医学遗传学系江苏省异种移植重点实验室南京211166 

基　　金：国家自然科学基金(编号:81874144、81970164) 

出 版 物：《安徽医科大学学报》 (Acta Universitatis Medicinalis Anhui)

年 卷 期：2022年第57卷第4期

页      码：505-509页

摘      要：目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立SERPING1-/-猪胎儿成纤维细胞(PFFs)系,为构建遗传性血管性水肿模型提供细胞实验材料。方法首先比较人/猪SERPING1氨基酸同源性。其次,分析猪SERPING1基因有效的编码区,据此选择第八外显子为敲除靶点,设计并合成靶向猪SERPING1的单导向RNA(sgRNA),连接到含有Cas9核酸内切酶的pX330载体上,构建SERPING1打靶载体pX330sgRNA,将其转染至猪胎儿成纤维细胞中,G418药物筛选阳性单克隆细胞。最后,用T7E1酶切实验检测靶点编辑情况,测序验证单克隆细胞基因型。结果生物信息学分析结果提示人/猪SERPING1蛋白氨基酸同源性较高,氨基酸比对相似性达到65.87%。成功构建打靶SERPING1的载体,并转染到细胞,药物筛选获得SERPING1基因敲除的单克隆细胞,测序确认了突变的基因型。结论人/猪SERPING1蛋白同源性较高,适合用于构建遗传性血管性水肿模型。构建的Cas9/sgRNA表达载体实现了SERPING1基因编辑,获得基因敲除的单细胞克隆,为后续SERPING1-/-猪模型的构建提供了必需的实验材料。

主 题 词：SERPING1 CRISPR/Cas9 猪胎儿成纤维细胞 

学科分类：1003[医学-口腔医学类] 10[医学] 

D　O　I：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2022.04.001

馆 藏 号：203109850...