ANXA2敲除的A549细胞系的构建及其对H1N1和H9N2流感病毒复制的影响

作     者：刘永宁 马欣傲 吕思莹 李媛 李旭勇 司振书 郭晶 李玉保 刘成 LIU Yong-ning;MA Xin-ao;LYU Si-ying;LI Yuan;LI Xu-yong;SI Zhen-shu;GUO Jing;LI Yu-bao;LIU Cheng

作者机构：聊城大学农学院聊城252000 

基　　金：山东省自然科学基金项目(No.ZR2020MC175) 山东省重点研发计划项目(No.2019GNC106082) 大学生创新创业训练计划项目(No.CXCY2020Y118,No.CXCY2021287)联合资助 

出 版 物：《中国人兽共患病学报》 (Chinese Journal of Zoonoses)

年 卷 期：2022年第38卷第4期

页      码：291-296,302页

摘      要：目的旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建ANXA2敲除的A549细胞,并探索ANXA2敲除对流感病毒复制的影响。方法本研究设计了3对靶向ANXA2基因外显子的特异性sgRNAs,分别将sgRNAs构建到LentiCRISPRv2载体上获得重组质粒,与辅助质粒共转染293T细胞包装成慢病毒后感染A549细胞,通过嘌呤霉素压力及有限稀释法筛选ANXA2基因敲除的单克隆细胞株,用靶基因测序及Western-blot验证ANXA2的敲除效果,并通过CCK-8试验比较ANXA2敲除细胞和野生型A549细胞的细胞活力。再分别用人流感病毒WSN(H1N1)和禽流感病毒SD98(H9N2)感染ANXA2敲除和野生型A549细胞,经TCID_(50)检测ANXA2敲除对流感病毒复制的影响。结果成功获得了ANXA2敲除的A549细胞系,且与野生型A549细胞相比,细胞活力无显著差异;ANXA2敲除后WSN(H1N1)和SD98(H9N2)流感病毒的病毒滴度均升高,其中ANXA2对SD98(H9N2)流感病毒的影响要大于WSN(H1N1)。结论本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了ANXA2敲除的A549细胞,并发现ANXA2敲除促进了流感病毒的复制,本研究为流感病毒复制和致病机制的研究奠定了基础。

主 题 词：CRISPR/Cas9 膜联蛋白A2 基因敲除 流感病毒 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1002-2694.2022.00.039

馆 藏 号：203110418...