2型猪链球菌cps2D基因敲除株的构建及其基本生物学特性的研究

作     者：刘旭苗 王悄悄 林苗 倪华 郑峰 王怡雯 汪春晖 潘秀珍 曹祥荣 LIU Xu-miao;WANG Qiao-qiao;LIN Miao;NI Hua;ZHENG Feng;WANG Yi-wen;WANG Chun-hui;PAN Xiu-zhen;CAO Xiang-rong

作者机构：南京师范大学生命科学学院南京210023 东部战区疾病预防控制中心南京210002 新疆帕米尔高原生物资源与生态重点实验室喀什大学生命与地理科学学院喀什844000 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(No.82072256) 江苏省自然科学基金面上项目(No.BK20201129)联合资助 

出 版 物：《中国人兽共患病学报》 (Chinese Journal of Zoonoses)

年 卷 期：2022年第38卷第4期

页      码：285-290页

摘      要：目的构建2型猪链球菌荚膜多糖基因簇中cps2D基因敲除株(Δcps2D),比较野毒株05ZYH33与敲除株Δcps2D基本生物学特性的差异。方法设计合成引物L1/L2、R1/R2、Spc1/Spc2,分别扩增cps2D基因上、下游同源臂L片段、R片段及Spc^(R)抗性基因S片段,将3个片段连接至pUC19线性载体上,构建敲除质粒pUC19::cps2D。将敲除质粒电转导入05ZYH33感受态细胞后,利用Spc^(R)抗性平板筛选敲除株,并通过组合PCR和RT-PCR进一步验证。比较野毒株05ZYH33和敲除株Δcps2D细菌生长特性、溶血活性、革兰染色、细菌链长、荚膜形态等方面的异同。结果L1/L2、R1/R2、Spc1/Spc2三组引物分别扩增出L(1030 bp)、R(1030 bp)以及S(1130 bp)基因片段;通过无缝克隆的方法成功构建出敲除质粒pUC19::cps2D;电转入感受态细胞后获得69个克隆,筛选出26个疑似敲除株;组合PCR以及RT-PCR筛选后获得cps2D基因敲除株Δcps2D;与野毒株05ZYH33相比,Δcps2D对数期生长变缓,链长显著变短,荚膜稀疏变薄。结论成功构建cps2D基因敲除株,为后续进一步研究其调控荚膜合成的作用机制奠定基础。

主 题 词：2型猪链球菌 荚膜多糖 酪氨酸激酶Cps2D 基因敲除 生物学性状 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1002-2694.2022.00.043

馆 藏 号：203110468...