H9N2亚型禽流感病毒三重RT-PCR诊断技术的建立与应用

作     者：陈欣 尹燕博 张乐萃 卢春晓 CHEN Xin;YIN Yan-bo;ZHANG Le-cui;LU Chun-xiao

作者机构：青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109 青岛即墨市畜牧兽医局山东即墨266200 

基　　金：山东省现代农业产业技术体系家禽创新团队建设项目(SDAIT-13-011-03) 国家自然科学基金(31272535) 

出 版 物：《中国兽医杂志》 (Chinese Journal of Veterinary Medicine)

年 卷 期：2014年第50卷第12期

页      码：16-19页

摘      要：为建立H9N2亚型禽流感病毒三重RT-PCR诊断技术,参考Gen Bank登录的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的HA、NA、M基因序列,利用Primer Premier5.0软件设计3对可扩增HA、NA、M基因的特异性引物以及反转录引物。3对引物扩增的c DNA片段大小分别为1 742、1 410、1 027 bp。结果:通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,建立了H9N2亚型禽流感病毒三重RT-PCR诊断技术,与目的片段大小相符的片段,经测序均正确,且与其他常见禽病病原不存在交叉反应。该方法对HA基因的最低检出量为10-2μg/μL c DNA,对NA基因的最低检出量为10-2μg/μL c DNA,对M基因的最低检出量为10-3μg/μL c DNA。通过对30份H9N2阳性病毒液进行三重PCR,均可同时扩出HA、NA、M基因。结果表明,本试验建立了H9N2亚型禽流感病毒三重RT-PCR诊断技术,为提高H9N2亚型禽流感病毒HA、NA、M基因序列分析的效率奠定基础。

主 题 词：H9N2亚型禽流感 HA基因 NA基因 M基因 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.0529-6005.2014.12.005

馆 藏 号：203110484...