牛副结核分枝杆菌可视化RPA-LFS快速检测方法的建立及应用

作     者：王金凤 刘立兵 项佳林 刘岳林 史云鹏 袁万哲 王建昌 WANG Jin-feng;LIU Li-bing;XIANG Jia-lin;LIU Yue-lin;SHI Yun-peng;YUAN Wan-zhe;WANG Jian-chang

作者机构：石家庄海关技术中心河北石家庄050050 河北农业大学动物医学院河北保定071001 

基　　金：河北省重点研发计划项目(19226636D) 河北农业大学精准畜牧学科群建设项目(1090064) 海关总署科研项目(2020HK170) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2022年第52卷第4期

页      码：444-449页

摘      要：本研究针对副结核分支杆菌(MAP)F57基因特异性保守序列,设计RPA引物和nfo探针,建立了快速检测MAP的结合侧流层析试纸条的肉眼可视化RPA检测方法(RPA-LFS)。结果显示,所建立的RPA-LFS方法在金属浴中39℃恒温振荡反应20 min后,将产物加至侧流层析试纸条中,可在5 min内实现对检测结果的肉眼可视化判定;所建立的RPA-LFS方法特异性强,仅对MAP产生扩增,与其他常见可引起牛腹泻的病原均无交叉反应;以含有F57基因全长的重组质粒pTOPO-T-F57作为模板,RPA-LFS的检出限为12 copies。进一步应用RPA-LFS方法对57份牛腹泻临床样本进行MAP检测,检出9份阳性结果,与实时荧光PCR方法检测结果一致。本研究建立的副结核分支杆菌可视化RPA-LFS方法操作简单,反应快速,不依赖于复杂精准的仪器设备、专业技术人员和严格的实验室环境条件,为养殖场一线的MAP现场检测提供了一种新的解决方案。

主 题 词：副结核分支杆菌 F57基因 RPA-LFS 可视化 快速检测 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0063

馆 藏 号：203110519...