羊布鲁菌外膜蛋白Omp22的原核表达及鉴定

作     者：张亮 张蕾 张芳琳 李璞媛 李凯 吴兴安 徐志凯 白文涛 ZHANG Liang;ZHANG Lei;ZHANG Fang-lin;LI Pu-yuan;LI Kai;WU Xing-an;Xu Zhi-kai;BAI Wen-tao

作者机构：第四军医大学微生物学教研室西安710032 

基　　金：军队科技攻关项目(06G091) 第四军医大学科研重点项目(05XJZ006)资助 

出 版 物：《科学技术与工程》 (Science Technology and Engineering)

年 卷 期：2009年第9卷第14期

页      码：3969-3973页

摘      要：布鲁菌外膜蛋白Omp22与布鲁菌致病性相关,又可诱导机体免疫反应。为进一步研究Omp22的特性,对其进行原核表达,并初步鉴定。根据Genbank序列,设计并合成羊布鲁菌外膜蛋白Omp22引物。以羊布鲁菌M5株基因组DAN为模板,PCR扩增并克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中。酶切鉴定正确后,测定序列;将重组质粒pGEX-4T-1-Omp22电转化大肠杆菌DH5α中,诱导表达,并采用羊布鲁菌兔免疫血清,Western-blot初步检测融合蛋白GST-Omp22表达情况和免疫学特性。结果PCR扩增出约660bp目的条带,与预期相符;酶切鉴定和测序结果表明,成功构建了pGEX-4T-1-Omp22原核表达载体;优化诱导温度,结果表明,在25℃诱导表达时,该融合蛋白大部分出现在上清中;Western-blot结果证实,GST-Omp22可与羊布鲁菌兔免疫血清特异性结合。说明成功构建了Omp22蛋白原核表达载体并进行了可溶性表达;该融合蛋白可与羊布鲁菌兔免疫血清特异性结合。Omp22蛋白的表达,为进一步研究布鲁菌的致病机制以及疫苗研制奠定基础。

主 题 词：羊布鲁菌 外膜蛋白Omp22 原核表达 鉴定 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 081704[081704] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-1815.2009.14.007

馆 藏 号：203111027...