PCR法筛选日本血吸虫cDNA文库中磷酸丙糖转移酶基因

作     者：童畅 汪学龙 沈际佳 

作者机构：安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032 

基　　金：安徽省科技厅科研基金 (编号 :0 0 2 2 0 31) 安徽省教育厅科研基金资助 (编号 :99ji0 1112 ) 

出 版 物：《安徽医科大学学报》 (Acta Universitatis Medicinalis Anhui)

年 卷 期：2002年第37卷第1期

页      码：3-5页

摘      要：目的　用PCR法自日本血吸虫童虫cDNA文库筛选磷酸丙糖转移酶 (TPM )基因 ,为进一步亚克隆和表达奠定基础。方法　根据GeneBank中的日本血吸虫TPM基因开放阅读框设计合成一对引物 ,应用PCR测定cDNA文库中该基因的频率。根据测得的频率 ,将适量的噬菌体接种于96孔细胞培养板上进行细菌培养扩增。再利用PCR鉴定阳性克隆所在位置 ,经过选择性扩增 ,筛选出阳性克隆 ,并环化成质粒 ,经测序验证后构建pGEM T/TPM克隆载体。结果　经过 3轮筛选 ,所得阳性克隆经过测序 ,用GenebankBLAST进行序列比较 ,证实为日本血吸虫磷酸丙糖转移酶基因。重组质粒 pGEM T经双酶切证实有约 76 0bp的插入片段。结论　从日本血吸虫cDNA文库中筛选出TPM基因 ,并成功地构建该基因的克隆载体 。

主 题 词：聚合酶链反应 基因文库 日本血吸虫 磷酸丙糖转移酶 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-1492.2002.01.002

馆 藏 号：203111152...