胞内劳森菌SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法的建立

作     者：郑新添 黄翠琴 黄其春 戴爱玲 谭晓珺 ZHENG Xin-tian;HUANG Cui-qin;HUANG Qi-chun;DAI Ai-ling;TAN Xiao-jun

作者机构：龙岩学院福建省预防兽医学与兽医生物技术重点实验室福建龙岩364000 

基　　金：福建省教育厅A类项目(JA11247) 福建省农业科技重点项目(2011N0025) 

出 版 物：《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 (Journal of Northwest A&F University(Natural Science Edition))

年 卷 期：2015年第43卷第12期

页      码：29-34页

摘      要：【目的】建立检测胞内劳森菌的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,为猪增生性肠炎的准确诊断奠定基础。【方法】针对胞内劳森菌16SrDNA序列设计引物,扩增16SrDNA,构建pT-LI-16S重组质粒。以pT-LI-16S为模板建立检测胞内劳森菌的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,检测其特异性、敏感性和重复性,并用该方法对51份疑似增生性肠炎病例进行检测。【结果】建立的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法特异性强,与大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和副猪嗜血杆菌等无交叉反应;在标准质粒含量为1.0×10^2-1.0×10^8拷贝/μL时,质粒含量与循环阈值（Ct）之间具有良好的线性关系（R^2=0.992）,最小可检测到10拷贝/μL的重组质粒;重复性检测显示其批内变异系数小于2%。该方法对粪便及小肠组织中胞内劳森菌的检出率分别为46.9%和84.2%,高于普通PCR的检出率（分别为40.7%和78.9%）。【结论】建立的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,能对胞内劳森菌进行快速检测及定量分析,可用于猪增生性肠炎的诊断。

主 题 词：胞内劳森菌 荧光定量PCR 猪增生性肠炎 检测方法 

学科分类：090603[090603] 090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.13207/j.cnki.jnwafu.2015.12.006

馆 藏 号：203111326...