鸭源H6N6亚型AIV荧光定量PCR方法的建立及应用

作     者：陈佳琪 嵇辛勤 段志强 阮涌 龙丹丹 文明 CHEN Jia-qi;JI Xin-qin;DUAN Zhi-qiang;RUAN yong;LONG Dan-dan;WEN Ming

作者机构：贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 贵州省动物疫病研究室贵州贵阳550025 

基　　金：贵州省科技计划项目(黔科合支撑1Y043号) 

出 版 物：《生物技术》 (Biotechnology)

年 卷 期：2022年第32卷第2期

页      码：159-163,181页

摘      要：[目的]为检测鸭感染H6N6亚型AIV后排毒及在组织器官病毒分布情况。[方法]通过建立H6N6亚型AIV荧光定量PCR检测方法,以H6N6亚型AIV M基因保守序列设计特异性引物,将分离到的H6N6亚型AIV病毒反转录为cDNA,进行pMD18-T-M基因克隆质粒构建,以其为标准品建立荧光定量PCR标准曲线,并进行敏感性和重复性试验,利用所建立的方法检测鸭感染H6N6亚型AIV后排毒及在组织器官病毒分布情况。[结果]该方法灵敏度高,最低检测到1.0×10^(1) copies/μL,从而可以得出拷贝数与Ct值之间的线性关系曲线表达式:Ct=-3.408×lg Copynumber+33.773(R^(2)=0.998),线性范围为1.0×10^(7)~1.0×10^(1)拷贝/μL,熔解峰的熔解温度在83℃左右。[结论]表明建立的鸭源H6N6亚型AIV荧光定量PCR检测方法,特异性强,重复性好,为后续实验研究提供了技术和数据支撑。

主 题 词：鸭 H6N6亚型禽流感 M基因 荧光定量 建立 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16519/j.cnki.1004-311x.2022.02.0025

馆 藏 号：203111359...