SV40T抗原荧光真核表达载体构建及在胰岛细胞中的表达

作     者：谭琪 李富荣 Tan Oi;Li Fu-rong

作者机构：暨南大学第二临床学院深圳市人民医院临床医学研究中心广东省深圳市518020 

出 版 物：《中国组织工程研究与临床康复》 (Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2008年第12卷第40期

页      码：7870-7874页

摘      要：背景:有研究表明小鼠胰岛细胞永生化以后增殖能力明显增强,但功能减弱。然而,小鼠的端粒和人类的端粒有差别,大鼠的端粒与人类的相似。目的:设计和构建SV40T荧光真核表达载体,导入大鼠胰岛细胞中进行表达鉴定。设计、时间及地点:细胞观察实验,于2007-10/2008-04在深圳市人民医院中心实验室完成。材料:选用成年雄性SD大鼠2只;pCMV-SV40T质粒;pSC-A质粒;pIRES2-ZsGreen1质粒。方法:用NotⅠ和XhoⅠ将SV40T片断从pCMV-SV40T质粒上双酶切下来,回收后克隆到载体pSC-A中成为pSC-SV40T,再用XhoⅠ和SacⅡ将SV40T片断双酶切下来,回收后正向克隆到荧光真核表达载体pIRES2-ZsGreen1中,酶切鉴定重组质粒;用脂质体转染的方法将构建的载体导入原代培养的大鼠胰岛细胞;检测SV40T基因在胰岛细胞中的表达。主要观察指标:绿色荧光蛋白的表达;SV40T的转录和翻译。结果:①经XhoⅠ和SacⅡ双酶切后,重组质粒被切成5.3kb和2.4kb2个片段,与理论预期长度相符。②pIRES2-ZsGreen1-SV40T重组基因经脂质体法转染,G418筛选,在胰岛细胞内可见绿色荧光,反转录-聚合酶链反应及细胞免疫荧光染色可见SV40T mRNA转录及其蛋白的表达。结论:实验成功构建了SV40T荧光真核表达载体,并可在大鼠胰岛细胞中表达。

主 题 词：多瘤病毒 弥猴 抗原 聚合酶链反应 荧光抗体技术 胰岛细胞 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1007[医学-药学类] 0403[0403] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 1010[医学-医学技术类] 100102[100102] 0703[理学-化学类] 0836[0836] 10[医学] 

D　O　I：10.3321/j.issn:1673-8225.2008.40.026

馆 藏 号：203111370...