靶向IL-6慢病毒介导RNA干扰实验性基因治疗类风湿关节炎

作     者：孙琳茜 王子叶 王丽芹 李清 常晓天 王吉波(指导) SUN Linqian;WANG Ziye;WANG Liqin;LI Qing;CHANG Xiaotian;WANG Jibo

作者机构：青岛大学附属医院风湿免疫科青岛266000 青岛大学附属医院医学研究中心青岛266000 

基　　金：国家自然科学基金项目(81671603) 山东省自然科学基金项目(ZR2016HM56)资助 

出 版 物：《中国免疫学杂志》 (Chinese Journal of Immunology)

年 卷 期：2022年第38卷第6期

页      码：649-655,660页

摘      要：目的:探讨靶向小鼠IL-6基因RNA干扰慢病毒载体颗粒(LV-IL-6-RNAi)对小鼠巨噬细胞株J774A.1细胞IL-6表达的影响,及其对胶原诱导性关节炎(CIA)的治疗作用。方法:设计合成3对特异性针对小鼠IL-6基因的小干扰RNA(siRNA)序列,筛选最高效siRNA序,构建高效LV-IL-6-RNAi。LV-IL-6-RNAi感染小鼠巨噬细胞株J774A.1细胞,并设慢病毒阴性对照(LV-NC-RNAi)、培养基空白对照,RT-qPCR检测J774A.1细胞的IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-1βmRNA相对表达水平,以检测LV-IL-6-RNAi体外干扰效率。取DBA/小鼠构建CIA模型并随机分为4组:LV-IL-6-RNAi组、LV-NC-RNAi组、甲氨蝶呤(MTX)阳性对照组、PBS空白对照组,分别关节腔注射LV-IL-6-RNAi、LV-NC-RNAi、腹腔注射MTX、PBS溶液,记录CIA小鼠关节炎评分,ELISA检测小鼠IL-6、IL-1β和TNF-α血清水平,组织病理检测炎症关节的炎症细胞浸润数。结果:成功构建了高效LV-IL-6-RNAi。在体外J774A.1细胞水平上,LV-IL-6-RNAi组IL-6 mRNA相对表达水平显著低于LV-NC-RNAi组、培养基空白对照组(F=33.47,P0.05)。首次免疫注射牛Ⅱ垂胶原后第28~35天成模,成模率为96.43%。首次免疫注射后第35天,CIA-LV-IL-6-RNAi组关节炎评分开始降低,首次免疫注射后第42天,CIA-LV-IL-6-RNAi组关节炎评分显著低于CIA-LV-NC-RNAi、CIA-PBS组(F=10.05,P0.05)。CIA-LV-IL-6-RNAi组和CIA-MTX组炎症关节病理切片高倍镜下炎症细胞的浸润数量均显著少于CIA-LV-NC-RNAi组和CIA-PBS组(F=141.80,P0.05)。结论:成功构建的高效LV-IL-6-RNAi可作为类风湿关节炎(RA)实验性基因治疗的有效手段。

主 题 词：白细胞介素-6 慢病毒 RNA干扰 基因治疗 类风湿关节炎 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-484X.2022.06.002

馆 藏 号：203111686...