环介导恒温扩增技术在呼吸道感染常见细菌临床检测中的应用评价

作     者：卫清 李荷楠 彭秋生 杨硕 王启 王占伟 王知任 王辉 WEI Qing;LI Henan;PENG Qiusheng;YANG Shuo;WANG Qi;WANG Zhanwei;WANG Zhiren;WANG Hui

作者机构：北京大学人民医院检验科北京100044 

基　　金：国家科技重大专项(2018ZX10732401-003-016) 

出 版 物：《微生物学通报》 (Microbiology China)

年 卷 期：2022年第49卷第5期

页      码：1811-1822页

摘      要：【背景】传统的细菌培养为下呼吸道感染诊断的金标准,但其检验周期长且敏感性低。环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术方法简单、检测快速,可应用于临床呼吸道感染常见细菌的快速检测。【目的】评估环介导恒温扩增技术对呼吸道感染常见7种细菌的检测能力。【方法】设计呼吸道感染常见的7种病原菌肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,SP)、卡他莫拉菌(Moraxella catarrhalis,MC)和流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae,HI)的环介导恒温扩增特异性引物,建立检测7种病原菌的LAMP方法。通过梯度稀释的方法检测敏感性,交叉反应实验检测特异性。回顾性分析2019年11月–2021年3月北京大学人民医院的240例疑似下呼吸道感染患者的呼吸道标本(痰和肺泡灌洗液)。利用自动化核酸提取仪提取DNA后,利用特异性引物进行环介导恒温扩增检测7种病原菌。检测结果与常规细菌培养结果进行比较,分析环介导恒温扩增的灵敏度和特异性,评估优化不同菌种的阳性判断值(Ct值),探讨环介导恒温扩增技术在临床上的应用价值。【结果】LAMP法检测结果与模板浓度具有较好的线性相关性,特异性实验结果表明LAMP体系的特异性较好,与其他菌株无交叉反应。共检测了218例痰和22例肺泡灌洗液样本,其中178例样本培养出7种目标菌,采用环介导恒温扩增法检测出7种目标菌的样本共176例。从提取核酸到环介导恒温扩增结果检出的平均检测时间为2–3 h,可同时检测多个样本。7种常见呼吸道病原菌流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、卡他莫拉菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和肺炎链球菌的最佳Ct值分别为18.5、20.0、20.0、15.0、25.0、19.0和18.0。检测灵敏度和特异性分别为肺炎克雷伯菌90.7%和94.1%,鲍曼不动杆菌84.0%和94.2%,铜绿假单胞菌90.8%和89.1%,卡他莫拉菌75.0%和99.2%,金黄色葡萄球菌81.8%和97.4%,流感嗜血杆菌75.0%和90.3%,肺炎链球菌33.3%和95.4%。肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌的环介导恒温扩增技术检测结果与痰培养半定量检测结果具有较好的符合率,R2值分别是0.8557、0.8044和0.9243。【结论】环介导恒温扩增技术操作简单、检测快速。与培养方法相比,环介导恒温扩增检测具有较高的特异性(89.1%–99.2%),其中针对肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的检测具有较高灵敏度(81.8%−90.8%),可用于临床呼吸道感染病原菌的快速诊断。环介导恒温扩增技术的检测结果与痰培养半定量的检测结果符合率较好。流感嗜血杆菌和肺炎链球菌由于培养阳性标本量较少,有待进一步评估。

主 题 词：环介导恒温扩增(LAMP) 下呼吸道感染 病原学诊断 

学科分类：1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13344/j.microbiol.china.210491

馆 藏 号：203111704...