山羊乳腺上皮细胞氧化损伤模型的建立

作     者：张元锌 王闫宇 云艳虹 陈俊朴 石惠宇 王学梅 ZHANG Yuanxin;WANG Yanyu;YUN Yanhong;CHEN Junpu;SHI Huiyu;WANG Xuemei

作者机构：海南大学动物科技学院海口570228 

基　　金：国家自然科学基金项目(31960677) 海南大学科研启动基金项目(KYQD(ZR)1943) 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2022年第49卷第5期

页      码：1917-1925页

摘      要：【目的】探究过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导山羊乳腺上皮细胞(GMEC)氧化损伤的最佳条件,构建可靠、稳定的氧化损伤模型,为今后探究紫大薯花青素对氧化损伤的保护机制提供模型条件。【方法】试验采用二因子完全随机设计,第一因素为H_(2)O_(2)处理浓度,分别为0(对照组)、350、430、460、490、520和550μmol/L,第二因素为对GMEC的处理时间,分别为8、11、14、17 h。舍弃细胞存活率低于60%的处理组,并根据结果重新调整处理浓度与时间。然后通过细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性、活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的含量以及培养液内乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性和总抗氧化能力(T-AOC)的测定确定最佳的H_(2)O_(2)处理条件。【结果】与对照组相比,各H_(2)O_(2)处理组作用8 h后GMEC存活率均显著降低(P<0.05),其中350、430、460μmol/L H_(2)O_(2)处理8 h时细胞存活率分别降低至64.6%、72.9%、66.2%,基本符合细胞存活率的筛选需求(70%)。因此,选择350、430、460、490、520μmol/L H_(2)O_(2)处理4、6、8、10 h进行后续试验。调整后,除4 h 430μmol/L处理组外,各处理组LDH活性在不同处理时间下均显著高于对照组(P<0.05),并随着时间的延长逐渐升高,10 h时各处理组LDH活性均达到最大值,且与浓度呈正比;各处理组ROS含量在6 h时均显著高于对照组(P<0.05),且8 h时各处理组ROS含量较6 h均大幅度显著升高(P<0.05),说明8 h为ROS含量变化的转折点;430、490、520μmol/L处理组MDA含量在处理8 h后均显著高于对照组(P<0.05),其中430μmol/L处理组MDA含量在8和10 h时显著高于对照组(P<0.05);各浓度组CAT、SOD、GSH-Px和T-AOC活性在处理6~8 h时均出现不同程度的降低,且8 h时仅430μmol/L处理组CAT、SOD、GSH-Px和T-AOC活性显著低于照组(P<0.05)。【结论】430μmol/L H_(2)O_(2)处理GMEC 8 h为构建GMEC氧化损伤模型最佳条件。

主 题 词：过氧化氢 山羊乳腺上皮细胞 氧化损伤 存活率 抗氧化 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.05.032

馆 藏 号：203111706...