SD大鼠白细胞介素10复制缺陷型重组腺病毒的构建及鉴定(英文)

作     者：李爽 宋仁刚 唐冰 朱斌 朱旭红 朱家源 毕良宽 Li Shuana;Song Ren-qang;Tang Bing;Zhu Bin;Zhu Xu-hong;Zhu Jia-yuan;Bi Liang-kuan

作者机构：南方医科大学珠江医院烧伤科广东省广州市510282 深圳市人民医院整形外科广东省深圳市518000 中山大学附属第一医院烧伤外科广东省广州市510080 甘肃省人民医院老年病研究所甘肃省兰州市730000 

出 版 物：《中国组织工程研究与临床康复》 (Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2009年第13卷第7期

页      码：1397-1400页

摘      要：背景:重组腺病毒质粒的构建是重组腺病毒制备过程中的中枢环节,传统的细胞内同源重组法步骤多、成功率低、实验周期长。目的:构建含有大鼠白细胞介素10(rIL-10)基因的重组复制缺陷型腺病毒***-10,为真核表达及其动物模型的研究提供实验基础。设计、时间及地点:开放性实验,于2005-07/2006-04在中山大学附属第一医院完成。材料:SD大鼠1只。AdEasy系统由美国JohnHopkins肿瘤研究中心惠赠。ThermoscriptTMRTkit和Trizol为Invitrogen产品;HEK-293保存于中山大学动物实验中心细胞库;克隆大鼠白细胞介素10基因引物合成及测序由上海博亚生物技术有限公司完成。方法:采用反转录聚合酶链反应的方法从健康SD大鼠脾脏新鲜组织中提取的总RNA中克隆rIL-10基因,采用AdEasy-1腺病毒载体系统经***5183细菌内同源重组及HEK-293包装而获得重组腺病毒***-10。主要观察指标:用Westernblot和RT-PCR的方法鉴定***-10并进行滴度测定。结果:自健康SD大鼠脾脏组织中克隆rIL-10基因,构建出重组腺病毒***-10。经PCR扩增、酶切鉴定、DNA测序最终确定插入序列为rIL-10,Westernblot和RT-PCR均检测出细胞内rIL-10基因及其蛋白表达。再通过扩增、纯化后获得滴度为1.0×1014pfu/mL的重组腺病毒。结论:采用AdEasy-1系统,经细菌内同源重组及HEK-293细胞包装、扩增,纯化后获得足够数量和质量的病毒,方法简便易行,结果稳定可靠。

主 题 词：白细胞介素10 腺病毒载体 基因疗法 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1007[医学-药学类] 0403[0403] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 1010[医学-医学技术类] 0703[理学-化学类] 0836[0836] 10[医学] 

馆 藏 号：203111726...