布鲁菌病多重PCR快速检测方法的建立及应用

作     者：王晶钰 张三东 刘红彦 李河林 程媛媛 李宇立 战美娜 WANG Jin-yu;ZHANG San-dong;LIU Hong-yan;LI He-lin;CHENG Yuan-yuan;LI Yu-li;ZHAN Mei-na

作者机构：西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100 

基　　金：国家十一五科技支撑计划项目(2006BAD4A11) 陕西省"13115"科技创新工程重大科技专项(2008ZDKG-05)资助 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2010年第31卷第S1期

页      码：5-9页

摘      要：根据GenBank中登录的布鲁菌(Brucella)omp31、bp26、omp10外膜蛋白基因序列,针对同一种病原,各设计合成了一对特异性引物,通过优化引物浓度组合,建立了检测布鲁菌472 bp、290 bp、162 bp片段的多重PCR快速检测方法。通过对该方法的特异性、敏感性和重复性试验,结果显示,该方法从布鲁菌标准菌株中扩增出了特异性的目的片段,而对大肠埃希菌等细菌的扩增结果均为阴性。经过对10倍倍比稀释的模板进行检测,多重PCR的敏感度为最低可检出1.1×10-3ng的DNA,在感染布鲁菌病奶牛乳汁模拟标本中最低可检出细菌数为80 cfu/mL。不同人员用该方法重复检测,结果均一致,表明重复性好。应用该方法对88份临床疑似布鲁菌感染的奶牛乳样进行了检测,结果检出17份阳性,阳性检出率约为19.3%。检测结果表明,该方法具有特异、敏感、重复性好等优点,可用于奶牛布鲁菌病的临床检测及流行病学监测等。

主 题 词：布鲁菌 外膜蛋白基因 多重PCR 检测 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1007-5038.2010.z1.002

馆 藏 号：203111731...