人类细小病毒B19核酸检测方法的建立及方法学验证

作     者：刘彬 朱丽媛 叶祥忠 吉尚志 张川 马莉 李长清 LIU Bin;ZHU Liyuan;YE Xiangzhong;JI Sangzhi;ZHANG Chuan;MA Li;LI Changqing

作者机构：中国医学科学院北京协和医学院输血研究所成都610052 北京万泰生物药业股份有限公司北京102206 

基　　金：国家药典委员会药品标准制修订研究课题的资助项目(2019S01 2020S04) 

出 版 物：《中国药品标准》 (Drug Standards of China)

年 卷 期：2022年第23卷第2期

页      码：161-168页

摘      要：目的:建立人类细小病毒B19实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测方法,并对该方法进行方法学验证。方法:针对B19病毒三种基因型的高度保守区设计特异性引物和探针,建立B19 Q-PCR标准曲线。并分别从检测限和定量限、型别覆盖能力、特异性、定量范围及定量线性、精密度、回收率、不同机型、以及不同混样模式进行方法学验证。结果:当B19病毒定量参考品范围为2.0×10^(1)~1.0×10^(8) IU·mL^(-1)时,R^(2)>0.99,扩增效率>97.2%,线性范围相关性良好。定量下限为20 IU·mL^(-1),检测下限为10 IU·mL^(-1),针对B19病毒3种基因型样本均能检出,具有相同的定量下限和检测下限。特异性结果显示,本方法检测甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒1型、人巨细胞病毒、戊型肝炎病毒、单纯疱疹病毒1型、梅毒螺旋体等核酸阳性血浆,均无非特异反应,且在上述病原体存在的情况下,B19病毒的定量下限和检测下限均能稳定检出,不受干扰。回收率结果显示,本方法回收率在50%-150%之间,RSD<30%。此外,本方法的精密性变异系数均小于3%,在ABI 7500和伯乐CFX-96机型上,相关技术指标均能达标。且采用48混合96混检测模式检测终浓度10^(4) IU·mL^(-1)和20 IU·mL^(-1)的样本,定量要求符合标准。结论:本方法线性范围广、灵敏度高、特异性和精密度好,回收率高,且可用于不同品牌的荧光定量PCR仪,适用范围广,检测模式灵活,可用于人血浆B19病毒核酸筛查,本研究将为血液制品质量标准提高提供技术储备。

主 题 词：人血浆 B19 实时荧光定量PCR 血液制品 质量标准 

学科分类：1007[医学-药学类] 10[医学] 

D　O　I：10.19778/j.chp.2022.02.011

馆 藏 号：203111750...