沉默MDR1基因增强急性早幼粒白血病耐药细胞HT9药物敏感性

作     者：邵淑丽 李旭艳 张伟伟 恽东泽 付博 张珍珠 

作者机构：齐齐哈尔大学生命科学与农林学院齐齐哈尔161006 

基　　金：黑龙江省自然科学基金(No.C200624) 黑龙江省教育厅科学技术项目(No.11511447 No.12511611)资助项目~~ 

出 版 物：《中国细胞生物学学报》 (Chinese Journal of Cell Biology)

年 卷 期：2012年第34卷第10期

页      码：983-987页

摘      要：该研究利用短发卡RNA(small hairpin RNA,shRNA)表达载体沉默HT9急性早幼粒白血病耐药细胞MDR1基因表达,以提高细胞对三尖杉酯碱、阿霉素的敏感性。通过设计合成编码shRNA的DNA模板序列,定向克隆到pSilencer 2.1-U6 neo质粒,成功构建1个P-gp蛋白基因特异的shRNA表达载体,稳定电转染HT9细胞,实时荧光定量PCR分析MDR1 mRNA表达,Western blot检测细胞P-gp蛋白表达,流式细胞术检测P-gp蛋白外排泵功能,MTT法检测细胞对药物敏感性。结果显示,成功构建了shRNA表达载体pSilencer 2.1-U6 neo-MDR1,转染HT9细胞后,PCR检测重组质粒整合到HT9/sh-2.1-1细胞基因组DNA,获得稳定遗传;HT9/sh-2.1-1细胞MDR1 mRNA表达降低了78.84%(P<0.01),P-gp蛋白表达降低了48.27%(P<0.05),细胞内Rho123相对荧光强度由(10.8±0.58)%升高至(73.56±1.37)%;转染细胞对三尖杉酯碱、阿霉素敏感性明显增强,IC50分别由(2.06±0.15)μmol/L降至(0.57±0.01)μmol/L、(4.04±017)μmol/L降至(1.56±0.05)μmol/L。提示shRNA干扰表达载体pSilencer 2.1-U6 neo-MDR1能够稳定、持久地抑制MDR1基因表达,并能有效增强HT9细胞对三尖杉酯碱、阿霉素的敏感性。

主 题 词：短发卡RNA MDR1基因 HT9细胞 三尖杉酯碱 阿霉素 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

馆 藏 号：203111904...