NF-κB基因RNA干扰质粒的构建与鉴定

作     者：方淑环 龚青 Fang Shuhuan;Gong Qing

作者机构：广州中医药大学临床药理研究所DME中心510024 广州医学院基础学院生化教研室510182 

基　　金：国家自然科学基金青年基金资助项目(31101003) 广东省医学科学技术研究基金资助项目(B2011134) 广州医学院博士基金资助项目(2010C01) 

出 版 物：《重庆医学》 (Chongqing medicine)

年 卷 期：2012年第41卷第33期

页      码：3504-3505,3508页

摘      要：目的构建转录因子NF-κB的RNA干扰(RNAi)质粒,为研究NF-κB参与的细胞信号通路及以其为靶点的基因治疗提供稳定转染的RNAi质粒。方法设计针对NF-κB的shRNA特异性序列,应用基因重组技术克隆到pSilencer 1.0-U6表达载体,EcoRⅠ和ApaⅠ双酶切及DNA测序鉴定重组克隆;脂质体转染RNAi重组载体至前列腺癌细胞PC-3后,Western blot分析各组NF-κB蛋白表达水平。结果双酶切和DNA测序证实shRNA正确插入pSilencer 1.0-U6质粒;Western blot结果显示与空质粒对照组比较NF-κB转染组细胞NF-κB表达明显下调。结论成功构建人NF-κB基因RNAi质粒,为研究NF-κB参与的细胞信号通路提供了稳定转染细胞的干扰质粒,为靶向NF-κB的基因治疗提供了有力工具。

主 题 词：核因子-κB RNA干扰 质粒 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-8348.2012.33.017

馆 藏 号：203111909...