双通道实时荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌药物耐药相关基因突变

作     者：柳清云 罗涛 李静 梅建 高谦 LIU Qing-yun;LUO Tao;LI Jing;MEI Jian;GAO Qian

作者机构：复旦大学教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032 上海市疾病预防控制中心结核病防治科 

基　　金：上海市科学技术委员会资助项目(10JC1413700) 

出 版 物：《中华检验医学杂志》 (Chinese Journal of Laboratory Medicine)

年 卷 期：2013年第36卷第1期

页      码：63-67页

摘      要：目的基于双标记荧光探针熔解曲线分析技术，建立一种利用实时荧光PCR快速检测结核分枝杆菌耐药突变的方法。方法根据结核分枝杆菌一线药物常见耐药突变位点（包括rpoB81bp耐药决定区、inhA启动子、katG315、ahpC启动子以及embB306）设计6条荧光双标记探针和对应引物，通过PCR扩增耐药突变位点所在基因片段，在扩增完成后通过熔解曲线检测分析实现对耐药突变的快速检测。通过对2008年上海市疾控中心收集的76株临床耐多药（MDR）菌株进行检测，验证本方法的敏感度和特异度。结果本方法成功从76株MDR菌株中检测出相关耐药突变，各种突变对应△Tm值范围为1．8～14．4℃。将检测结果和测序结果对比表明该方法检测敏感度和特异度都为100％（rpoB，80／80；inhA，7／7；katG315，59／59；ahpC，8／8；embB306，27／27）。本方法可以成功从最低浓度为100拷贝／μl的结核分枝杆菌DNA样本中准确地检测耐药突变。结论双通道实时荧光PCR熔解曲线法可以快速灵敏地检测结核分枝杆菌常见耐药突变。该方法具有检测迅速准确、结果易判读、交叉污染概率低等特点，可用于快速检测临床结核耐药相关的基因突变，并对结核耐药情况进行评估。（中华检验医学杂志．2013．36：63-67）

主 题 词：实时聚合酶链反应 分枝杆菌 结核 突变 

学科分类：100208[100208] 1002[医学-临床医学类] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2013.01.016

馆 藏 号：203111916...