基于qPCR检测方法的溺死诊断研究

作     者：余仲昊 徐曲毅 肖成 李欢 吴伟斌 杜蔚安 赵建 刘宏 王慧君 刘超 YU Zhonghao;XU Quyi;XIAO Cheng;LI Huan;WU Weibin;DU Weian;ZHAO Jian;LIU Hong;WANG Huijun;LIU Chao

作者机构：南方医科大学法医学院广州510515 广州市刑事科学技术研究所公安部法医病理学重点实验室广州510442 重庆医科大学基础医学院重庆400016 广东华美众源生物科技有限公司广东佛山518000 

基　　金：广州市科技计划(2019030012、2019030001) 公安部科技强警基础工作专项(2020GABJC38) 

出 版 物：《刑事技术》 (Forensic Science and Technology)

年 卷 期：2022年第47卷第3期

页      码：252-260页

摘      要：目的针对水体中常见的硅藻、蓝藻和气单胞菌,设计相应引物,采用qPCR方法进行检测,验证该方法的特异性和检测灵敏度,并探讨其在溺死诊断中的应用价值。方法设计与溺死相关的浮游生物特异引物ND、UPA、CBR、AER、HLYA、rPOD;扩增20种浮游生物标准株DNA以确定其特异性和灵敏度;检测38只实验兔的肺、肝、肾组织的样本,计算设计的6对引物扩增产物的总体检测阳性率,并与相应的硅藻电镜检验结果对比,验证所建立方法诊断溺死的有效性。结果ND、UPA两对引物能特异扩增硅藻属,CBR能特异扩增蓝藻属,AER、HLYA、rPOD能特异扩增气单胞菌属;以上6对引物扩增产物均能达到0.0001ng的检测灵敏度。实验兔的qPCR检测结果显示,16只溺死兔肺组织均为阳性,且分别有13例肝和14例肾呈阳性,总体诊断阳性14例,阳性率可达87.50%;16只死后浸泡兔和6只空白对照兔中,只有5例死后浸泡兔的肺组织检出阳性,其余皆为阴性。电镜结果显示,16只溺死兔的肺、肝、肾均为阳性,16只死后浸泡兔和6只空白对照兔中,只有5例死后浸泡兔的肺组织电镜检出硅藻阳性,其余皆为阴性,与qPCR结果相一致;经统计学分析,上述两种方法对38只实验兔的总体诊断结果差异没有统计学意义(P=0.49>0.05),对38只实验兔的所有肺、肝、肾样本检测的诊断阳性率差异没有统计学意义(P=0.29>0.05)。结论上述6对引物结合qPCR检测方法进行溺死诊断,具有较高的灵敏度,且特异性较好,具有良好的应用前景。

主 题 词：法医学 溺死诊断 实时荧光定量PCR(qPCR) 硅藻 蓝藻 气单胞菌 

学科分类：0301[法学-法学类] 03[法学] 030106[030106] 

D　O　I：10.16467/j.1008-3650.2021.0150

馆 藏 号：203111935...