实时荧光单引物等温扩增(SPIA)技术检测大肠杆菌O157的方法研究

作     者：李瑞 王建昌 李静 胡连霞 张伟 LI Rui;WANG Jian-chang;LI Jing;HU Lian-xia;ZHANG Wei

作者机构：河北农业大学食品科技学院河北保定071000 

基　　金：质检公益性科研专项项目(201210128 201310126) 

出 版 物：《现代食品科技》 (Modern Food Science and Technology)

年 卷 期：2016年第32卷第2期

页      码：317-322,316页

摘      要：建立一种快速、灵敏的食品中肠出血性大肠杆菌O157的检测方法。以大肠杆菌O157的特异性基因(rfbE)为靶序列,设计相应的RNA/DNA组合引物和链终止序列,优化引物浓度、Mg2+浓度、温度等反应条件,建立实时荧光单引物等温扩增(Real Time Fluorescence Single Primer Isothermal Amplification,实时荧光SPIA)检测大肠杆菌O157的方法,并对该方法的特异性、灵敏度以及人工污染检出限进行检测。确定了实时荧光SPIA法的最适反应条件,该方法可以在55 min内完成检测工作,除大肠杆菌O157外,其他细菌均未产生特异性荧光扩增曲线,而且实时荧光SPIA检测大肠杆菌O157的灵敏度为2.0 CFU/m L,对猪肉人工污染样品中大肠杆菌O157的检出限是4.0 CFU/g。实时荧光SPIA方法检测大肠杆菌O157具有耗时短,灵敏度高,特异性强,方法简便的优越性,为检测食源性致病菌构建了一个技术平台。

主 题 词：大肠杆菌O157 rfbE基因 检测 

学科分类：0832[0832] 1004[医学-公共卫生预防医学类] 09[农学] 0903[农学-动物生产类] 

D　O　I：10.13982/j.mfst.1673-9078.2016.2.046

馆 藏 号：203112060...