环境水体中痢疾志贺菌荧光定量PCR检测方法研究

作     者：毛怡心 孙宗科 郑萍 陈西平 MAO Yi-xin;SUN Zong-ke;ZHENG Ping;CHEN Xi-ping

作者机构：中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所北京100021 

基　　金：国家卫生和计划生育委员会公益性卫生行业科研专项(201302004) 

出 版 物：《环境与健康杂志》 (Journal of Environment and Health)

年 卷 期：2016年第33卷第2期

页      码：145-148页

摘      要：目的对环境水体中痢疾志贺菌荧光定量PCR检测方法进行研究和评价。方法根据痢疾志贺菌侵袭性质粒抗原H(invasion plasmid antigen H,ipa H)基因设计引物,利用普通PCR方法扩增其ipa H基因并将其与T载体进行连接以获得ipa H-T重组质粒;对重组质粒进行梯度稀释后进行荧光定量PCR,观察其标准曲线及最低检出限;提取17株可在环境水样中存在的多种致病菌DNA并以同样反应体系进行荧光定量PCR,验证该方法的特异性;将痢疾志贺菌加标于地表水水样中,测试该方法的环境样品检测能力。结果成功扩增痢疾志贺菌ipa H基因并连接T载体;通过荧光定量PCR检测各梯度浓度重组质粒的Ct值间隔相近,检出限低至10 copies;17株致病菌DNA的检测结果均为阴性,显示该方特异性好;在环境地表水菌落总数为3.5×103 CFU/ml、痢疾志贺菌加标浓度低至5 CFU/ml时,仍可以通过该方法检出,显示该方法的抗干扰能力强,可用于环境水样的直接检测。结论通过荧光定量PCR方法可实现对水中痢疾志贺菌进行快速检测,检测时限3 h以内,检测浓度5 CFU/ml,特异性及抗干扰性好,可用于污染水样的快速直接检测。

主 题 词：痢疾志贺菌 荧光定量PCR 细菌性痢疾 侵袭性质粒抗原H 

学科分类：12[管理学] 1204[管理学-公共管理类] 120402[120402] 1004[医学-公共卫生预防医学类] 10[医学] 

D　O　I：10.16241/j.cnki.1001-5914.2016.02.015

馆 藏 号：203112063...