鼠疫多重荧光定量PCR内标检测方法的建立与应用评价

作     者：李博 崔燕 安静 古丽阿依·包开西 罗勇军 王信惠 黎唯 王效俊 Li Bo;Cui Yan;An Jing;Guliayi·Baokaixi;Luo Yongjun;Wang Xinhui;Li Wei;Wang Xiaojun

作者机构：新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心新疆乌鲁木齐830001 新疆农业科学院新疆乌鲁木齐830091 

基　　金：新疆维吾尔自治区自然科学基金(No.2018D01C089) 

出 版 物：《疾病监测》 (Disease Surveillance)

年 卷 期：2022年第37卷第5期

页      码：657-660页

摘      要：目的建立一种鼠疫多重荧光定量PCR内标检测方法,并进行应用效果评价。方法选择鼠疫菌染色体YPO0393基因与pMT1质粒caf1基因为靶基因,设计合成YPO0393-内标模板、特异性引物和TaqMan荧光探针,构建鼠疫多重荧光定量PCR内标检测体系;对非鼠疫菌DNA、不同稀释浓度鼠疫菌DNA、野外监测样本进行检测,评价该方法的特异性、灵敏性、重复性和应用效果。结果采用多重荧光定量PCR内标方法,8株鼠疫菌DNA均出现明显的扩增曲线,12株非鼠疫菌DNA未显示扩增曲线,提示该方法特异性良好。不同浓度的鼠疫EV76疫苗株DNA,检测最低限为22.5×10^(-4)ng/μL,变异系数为0.99~3.42,提示灵敏性、重复性较好。105份野外监测样本中,荧光定量PCR内标方法检测阳性的6份,与普通PCR方法检测结果一致,4份样本分离培养出鼠疫菌且采用PCR方法检测阳性。结论通过设置双靶基因与内标对照,本研究建立的鼠疫多重荧光定量PCR内标方法可降低检测假阳性率,特异性、灵敏性和重复性理想,可用于鼠疫快速检测。

主 题 词：鼠疫耶尔森菌 多重荧光定量PCR方法 内标对照 评价 

学科分类：1006[医学-中西医结合类] 1005[医学-中医学类] 1004[医学-公共卫生预防医学类] 100401[100401] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3784/jbjc.202103230145

馆 藏 号：203112210...