黄疸出血群钩端螺旋体LAMP-LFB快速检测方法的建立与应用

作     者：王毅 杨幸贵 刘英 黄俊飞 王铭 营夏 谭勤琴 胡勇 李世军 Wang Yi;Yang Xinggui;Liu Ying;Huang Junfei;Wang Ming;Ying Xia;Tan Qinqin;Hu Yong;Li Shijun

作者机构：首都儿科研究所实验中心北京100020 贵州医科大学公共卫生学院环境污染与疾病监控教育部重点实验室贵州贵阳550025 贵州省疾病预防控制中心贵州贵阳550004 

基　　金：国家自然科学基金(No.81760366,No.81960622) 贵州省高层次创新型人才培养项目[No.黔科合(2016)4021] 

出 版 物：《疾病监测》 (Disease Surveillance)

年 卷 期：2022年第37卷第5期

页      码：646-651页

摘      要：目的基于环介导恒温扩增(LAMP)结合纳米生物传感条(LFB)技术,建立并评价黄疸出血群钩端螺旋体(钩体)的LAMP-LFB快速检测方法。方法以黄疸出血群钩体O抗原基因簇中的糖基转移酶基因(gtf)为检测靶标并设计特异性LAMP引物。通过对LAMP引物的特定标记(FIP-FAM和LF-Biotin)和优化试验,建立LAMP-LFB快速检测方法,并分析其灵敏度和特异性。应用建立的LAMP-LFB、普通PCR方法和显微凝集试验(MAT),分别对53株钩体分离菌株进行鉴定,比较分析鉴定结果并评价LAMP-LFB方法的实用性。结果灵敏度和特异性试验显示,LAMP-LFB方法可检出黄疸出血群赖型56601基因组DNA的最低浓度为100 fg/μL,检测特异性为100%,与其余血清群和非钩体菌株核酸无交叉反应。菌株鉴定结果显示,LAMP-LFB与MAT鉴定结果完全一致,符合率为100%,其敏感性高于PCR方法。此外,LAMP扩增产物经LFB验证,可直接通过观察检测线(TL)和质控线(CL)进行结果判定。结论基于gtf基因建立的LAMP-LFB检测技术方便、快捷且重复性好,可快速、灵敏、特异地鉴定黄疸出血群钩体菌株,能够作为有价值的黄疸出血群钩体菌株快速鉴别或诊断方法。

主 题 词：环介导恒温扩增 纳米生物传感 钩端螺旋体 黄疸出血群 

学科分类：1007[医学-药学类] 1006[医学-中西医结合类] 1005[医学-中医学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3784/jbjc.202108030429

馆 藏 号：203112260...