甘蔗褐锈病菌单管巢式PCR检测体系的建立

作     者：吴伟怀 刘宝慧 鹿鹏鹏 梁艳琼 贺春萍 李锐 易克贤 WU Weihuai;LIU Baohui;LU Pengpeng;LIANG Yanqiong;HE Chunping;LI Rui;YI Kexian

作者机构：中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业农村部热带作物有害生物综合治理重点实验室海口571101 南京农业大学植物保护学院南京210095 海南大学植物保护学院海口570228 

基　　金：国家重点研发计划项目(2018YFD0201100)资助 

出 版 物：《中国糖料》 (Sugar Crops of China)

年 卷 期：2022年第44卷第3期

页      码：1-7页

摘      要：由黑顶柄锈菌(Puccinia melanocephala Sydow)引起的甘蔗褐锈病是甘蔗生产中较为严重的叶部病害之一。建立该病原菌的高效检测与特异性鉴定技术体系,对于该病害的监测、预警以及及时采取必要的防治措施均具有重要的意义。为此,本文基于甘蔗褐锈病菌ITS序列保守区域位点设计了该病原菌的单管巢式PCR引物对,对外内引物退火温度、外内引物浓度比两个方面进行筛选与优化,并对所建立的单管巢式PCR检测体系的特异性和灵敏度进行了分析。结果表明,所设计的甘蔗褐锈病菌单管巢式PCR外引物PmF1/R1、内引物PmF2/R2的退火温度分别为63℃与52℃,以及外引物PmF1/R1与内引物PmF2/R2最佳终浓度比例为0.5 pmol/L∶0.5μmol/L时,单管巢氏PCR检测体系较佳。所建立的甘蔗褐锈病菌单管巢式PCR检测体系仅从含有甘蔗褐锈病菌DNA模板中检测出预期大小的特异性条带,而从含甘蔗黄锈病菌、咖啡驼孢锈菌、鸡蛋花鞘锈菌、葡萄层锈病菌、甘蔗黑穗病菌、橡胶炭疽病菌、咖啡褐斑病菌、稻瘟病菌、剑麻茎腐病菌的DNA中并未扩增出任何条带。通过模板梯度稀释法证实,所建立的单管巢氏PCR检测体系的最低检测限为10 fg/μL,是普通PCR灵敏度的1000倍。田间19份疑似病样单管巢式PCR检测结果,有18份样品DNA中含有甘蔗褐锈病菌。本检测方法可以用于甘蔗褐锈病病原菌的快速诊断及其病害监测,为该病害预测、预报提供技术支持。

主 题 词：甘蔗 褐锈病 黑顶柄锈菌 单管巢式PCR 检测 

学科分类：09[农学] 0901[农学-植物生产类] 

D　O　I：10.13570/j.cnki.scc.2022.03.001

馆 藏 号：203112404...