利用CRISPR/Cas9技术建立OXTR基因敲除猪胎儿成纤维细胞系

作     者：刘静静 刘晓蕊 李琳 王盈 杨海元 戴一凡 LIU Jing-jing;LIU Xiao-rui;LI Lin;WANG Ying;YANG Hai-yuan;DAI Yi-fan

作者机构：南京医科大学江苏省异种移植重点实验室南京211166 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(81874144 81970164) 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2022年第38卷第6期

页      码：272-278页

摘      要：利用CRISPR/Cas9系统建立催产素受体(oxytocin receptor,OXTR)基因敲除的巴马猪胎儿成纤维细胞系(porcine fetal fibroblasts,PFFs),为构建OXTR基因敲除巴马猪模型提供供体细胞。首先,对人和猪的OXTR基因进行了生物学信息分析。其次,利用在线设计工具设计了2个靶向猪OXTR外显子区的sgRNA,并克隆至pX330骨架质粒中,最后将打靶质粒和Neomycin抗性质粒共转染至PFFs中,用G418药物筛选出抗性单克隆细胞,测序鉴定其基因型。生物信息学分析显示人和猪OXTR基因进化距离较近,氨基酸序列一致性达到91%,相似性为93%,三维结构的RMSD值为0.009。成功构建OXTR基因的Cas9/sgRNA打靶载体,转染PFFs细胞后,药物筛选获得OXTR基因敲除的单克隆细胞并测序证实了基因突变型。人和猪OXTR基因具有高度同源性;构建的Cas9/sgRNA表达载体高效实现了OXTR基因编辑,成功获得基因敲除的单细胞克隆,为后续构建OXTR敲除的巴马猪模型奠定了前期基础。

主 题 词：CRISPR/Cas9 OXTR基因 生物信息分析 猪胎儿成纤维细胞 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 100205[100205] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2021-1432

馆 藏 号：203112992...