人造血增效因子在大肠杆菌中的表达及其生物学作用

作     者：齐春梅 杨克恭 陈松森 张艳丽 邓艳春 苏林 王亚栋 罗丝 刘长征 罗庆良 熊国林 

作者机构：中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 军事医学科学院放射医学研究所 

出 版 物：《中华血液学杂志》 (Chinese Journal of Hematology)

年 卷 期：2004年第25卷第11期

页      码：666-670页

摘      要：目的　研究人造血增效因子 (hHSF)在大肠杆菌 (E .coli)中的表达及其动员恒河猴外周血造血干 /祖细胞的作用。方法　应用重叠PCR方法合成编码hHSF的DNA片段 ,克隆测序证实其序列正确后 ,重组到表达载体 pET30a中 ,转入E .coliBL2 1(DE3) ,并用IPTG诱导表达 ,目的蛋白用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯化和复性。用飞行时间质谱仪和氨基酸测序仪分别测定纯化的目的蛋白相对分子质量、N端氨基酸序列以及氨基酸组成。选用恒河猴 8只 ,随机分为两组 ,每组4只 :一组为单次皮下注射重组hSCF 5 0 0 μg/kg ,另一组为皮下注射rhG CSF 10 μg·kg-1·d-14d后 ,单次注射rhHSF 5 0 0 μg/kg。观察恒河猴外周血CD34+ 细胞、CFU GM数目以及血常规。结果　测序证实合成的hHSF序列与设计一致 ,构建的重组表达载体 pET30a hHSF在E .coli中获高效表达 ,目的蛋白占菌体总蛋白的 30 %左右 ,主要以包涵体形式存在。目的蛋白纯度达 95 %以上 ,N端前 10个氨基酸序列分析结果与预期一致 ;相对分子质量为 75 4 0 ;氨基酸组成分析结果与理论值基本一致。恒河猴实验结果表明 ,单次皮下注射重组hHSF后外周血CD34+ 细胞、CFU GM和中性粒细胞数分别在用药后 3h ,1h和 4 5min达高峰 ,动员幅度分别为用药前检测值的 16 .3倍、1.9?

主 题 词：动员 恒河猴 外周血 CFU-GM 中性粒细胞 CD34^+细胞 人造血 高效表达 E.coli 重叠PCR 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/j:issn:0253-2727.2004.11.007

馆 藏 号：203113123...