橡胶树白粉病PMA-qPCR检测体系及应用

作     者：官鑫 涂敏 蔡海滨 王云月 曾霞 胡彦师 GUAN Xin;TU Min;CAI Haibin;WANG Yunyue;ZENG Xia;HU Yanshi

作者机构：中国热带农业科学院橡胶研究所海南海口571101 云南农业大学植物保护学院云南昆明650201 

基　　金：国家重点研发计划项目(2019YFD10005002-0303) 农业农村部农垦局物种资源保护项目(18220019) 

出 版 物：《广东农业科学》 (Guangdong Agricultural Sciences)

年 卷 期：2022年第49卷第5期

页      码：102-109页

摘      要：【目的】橡胶树白粉病是迄今为止我国橡胶树最重要的叶部病害,通过将叠氮溴化丙啶(PMA)与实时荧光定量PCR技术(qPCR)相结合,构建橡胶树白粉病PMA-qPCR检测体系,为及时高效检测橡胶树白粉菌分生孢子活菌量提供技术支撑。【方法】根据橡胶树白粉菌核糖体内转录间隔区(ITS)序列保守区设计引物,验证其特异性,以该菌重组质粒pMD-19T-Eq绘制标准曲线,建立橡胶树白粉病PMA-qPCR检测体系,对其重复性和灵敏度进行评价,并运用该体系对丙环唑处理橡胶树白粉病病叶后的活菌数进行检测。【结果】研究设计的引物特异性良好,构建的橡胶树白粉菌qPCR标准曲线循环阈值(Ct)与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数为0.9981,扩增效率为107.97%。PMA-qPCR对活孢子悬浮液扩增几乎无影响,检测灵敏度为4.77×10^(2) copies/μL。在丙环唑处理橡胶树白粉病15 min后,活菌比例从66.13%下降至23.18%。【结论】PMA-qPCR检测体系能快速定量检测橡胶树白粉病活菌量,具有灵敏、准确和高效的优点,为该病害的预测预报及防治效果提供理论依据和技术手段。

主 题 词：橡胶树 白粉病 PMA-qPCR技术 分生孢子 丙环唑 

学科分类：09[农学] 0904[农学-动物医学类] 

D　O　I：10.16768/j.issn.1004-874X.2022.05.012

馆 藏 号：203113301...