基于实时荧光重组酶聚合酶扩增(RPA)技术的金黄色葡萄球菌快速检测方法的建立

作     者：徐健皓 李佳欣 白欣茹 李世青 王亚茹 袁媛 王景林 XU Jian-hao;LI Jia-xin;BAI Xin-ru;LI Shi-qing;WANG Ya-ru;YUAN Yuan;WANG Jing-lin

作者机构：福建农林大学生命科学学院福州350002 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 河北师范大学石家庄050024 昆明理工大学生命科学与技术学院昆明650500 

出 版 物：《军事医学》 (Military Medical Sciences)

年 卷 期：2022年第46卷第6期

页      码：441-446页

摘      要：目的建立一种针对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)辅助耐药基因femB的实时荧光重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术检测方法,并评价其灵敏度、特异性以及实用性。方法针对femB特异基因设计RPA候选扩增引物以及RPA荧光探针,设置同一浓度的阳性质粒浓度筛选出最优的RPA扩增引物,建立SA的实时荧光RPA(exo-RPA)检测方法,并设置SA基因组DNA浓度梯度测试该检测方法的灵敏度;选用11种其他致病菌基因组DNA测试方法特异性。最后模拟临床血液样本比较该法与qPCR检测方法的阳性检出率,评价方法的实用性。结果SA-exo-RPA检测方法在39℃反应温度下,5~10 min内可快速检出最低浓度为1 amol/L(3.82 fg)的SA基因组DNA,且特异性高,与其他致病菌无交叉反应。模拟临床血液样本阳性检出率与已发表文献中qPCR检测方法一致,不受样本中复杂成分的非靶标核酸干扰。结论该研究建立的SA-exo-RPA检测方法具有快速、高灵敏度和高特异性的优点,可应用于SA的现场快速检测。

主 题 词：重组酶聚合酶扩增 金黄色葡萄球菌 femB 敏感性与特异性 快速检测 

学科分类：1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

D　O　I：10.7644/j.issn.1674-9960.2022.06.009

馆 藏 号：203113369...