幽门螺杆菌儿童分离株中性粒细胞激活蛋白克隆及表达序列

作     者：周珍文 关锐梨 夏慧敏 付捷 邓秋连 谢永强 黄勇 廖灿 龚四堂 ZHOU Zhen-wen;GUAN Rui-li;XIA Hui-min;Fu Jie;DENG Qiu-lian;XIE Yong-qiang;HANG Yong;Liao Can;GONG Si-tang

作者机构：广州医学院附属儿童医院 广州市妇女儿童医疗中心微生物实验室广东广州510623 

基　　金：国家自然科学基金(30801054) 广东省自然科学基金(8451012001001570) 广州市医药卫生科技基金(2008-YB-067) 广州市妇女儿童医疗中心博士启动基金(30307-3200818) 

出 版 物：《广州医学院学报》 (Academic Journal of Guangzhou Medical College)

年 卷 期：2011年第39卷第3期

页      码：86-90页

摘      要：目的:从幽门螺杆菌临床儿童分离株GZCH1基因组扩增中性粒细胞激活蛋白(NAP)基因,克隆入T载体,并亚克隆入表达载体pGEX-4T-1,进行测序及基因比对分析,为幽门螺杆菌疫苗研制奠定基础。方法:根据GenBank中幽门螺杆菌NAP序列,设计一对特异性引物扩增幽门螺杆菌临床儿童分离株NAP全长基因,与T载体连接,转化大肠杆菌DH5α,提取质粒进行酶切、测序鉴定,经EcoRⅠ、NotⅠ双酶切后与做相应酶切的pGEX-4T-1连接,转化大肠杆菌BL21,提取质粒进行双酶切鉴定,IPTG诱导重组蛋白表达,并对基因进行测序及比对分析。结果:以幽门螺杆菌儿童分离株GZCH1为模板,成功扩增了NAP基因,基因大小为435 bp,重组pGEX-4T-1-NAP双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示NAP在正确读框中,序列比对分析显示其与幽门螺杆菌J99株氨基酸一致性达99.2%,IPTG诱导后,pGEX-4T-1-NAP/BL21在相应分子量(42.8 kD)可见融合蛋白的表达。幽门螺杆菌儿童分离株GZCHl NAP序列已登录GenBank(登录号:GU301881)。结论:从幽门螺杆菌临床儿童分离株GZCH1中成功克隆了NAP基因,并获得重组蛋白的表达,为NAP幽门螺杆菌疫苗研制奠定了良好的基础。

主 题 词：幽门螺杆菌 儿童 中性粒细胞激活蛋白 克隆 表达 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-1836.2011.03.023

馆 藏 号：203113388...