番木瓜果实酵母双杂交文库的构建及CpMYB114L互作蛋白的筛选

作     者：周陈平 杨敏 郭金菊 邝瑞彬 杨护 黄炳雄 魏岳荣 ZHOU Chenping;YANG Min;GUO Jinju;KUANG Ruibin;YANG Hu;HUANG Bingxiong;WEI Yuerong

作者机构：广东省农业科学院果树研究所农业农村部南亚热带果树生物学与遗传资源利用重点实验室广东省热带亚热带果树研究重点实验室广东广州510640 广东省农业科学院设施农业研究所广东广州510640 

基　　金：国家自然科学基金项目(32102355) 广东省现代农业产业技术体系创新团队建设项目(优稀水果)(2021KJ116) 广州市科技计划项目(202102020038) 广东省基础与应用基础研究基金项目(2020A1515011166) 广东省农业科学院院长基金项目(202011) 

出 版 物：《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 (Journal of Northwest A&F University(Natural Science Edition))

年 卷 期：2022年第50卷第7期

页      码：127-137页

摘      要：【目的】从番木瓜4个不同成熟期果实的转录组中筛选并克隆得到1个转录因子CpMYB114L,构建番木瓜果实的cDNA文库,筛选与CpMYB114L互作的蛋白,探究CpMYB114L参与调控果实成熟的分子机理。【方法】以番木瓜‘GZBG’品种的果实为材料,设计特异引物,克隆CpMYB114L CDS区,利用生物信息学软件分析该基因序列及其编码的蛋白序列。提取番木瓜不同成熟期果实的总RNA,利用all-direct法建立酵母双杂交cDNA文库。构建pGBKT7-CpMYB114L诱饵载体,对其自激活检测后,通过共转化从文库中筛选CpMYB114L互作蛋白。通过在NCBI网站上进行序列比对,明确互作蛋白的功能分类,最后对各类蛋白基因在番木瓜不同成熟期果实中的表达进行分析。【结果】CpMYB114L基因的CDS序列编码227个氨基酸,预测其相对分子质量为26304.3,理论等电点为6.23,亲水性总平均值为-0.893。CpMYB114L蛋白序列与甜樱桃(PaWERL)、蒺藜苜蓿(MtMYB1)、黧豆(MpMYB113)、大豆(GmMYB1)和苹果(MdMYB308L)的同源性较近。cDNA文库总库容为1.15×10^(7) CFU,重组率100%,插入片段长度为750~2000 bp。诱饵载体pGBKT7-CpMYB114L不存在自激活。从酵母双杂交文库中筛选到30个初始阳性克隆,经回转验证后最终获得26个与CpMYB114L互作的蛋白,共分为4类,包括乙烯响应受体1(CpERS1)、酰基辅酶A硫酯酶13(CpAcots13)、热休克蛋白42(CpHSP42)和叶绿体转运子159(CpTOC159)。在果实成熟过程中,CpERS1和CpHSP42表达量先上升后下降,CpAcots13表达量持续上升,CpTOC159表达量剧增后趋于平稳。【结论】推测CpMYB114L与CpERS1蛋白互作参与番木瓜果实成熟的调控。

主 题 词：番木瓜 酵母双杂交 果实成熟 CpMYB114L 互作蛋白筛选 

学科分类：09[农学] 0902[农学-自然保护与环境生态类] 090201[090201] 

核心收录：

D　O　I：10.13207/j.cnki.jnwafu.2022.07.015

馆 藏 号：203113414...