3种淡水鱼病原菌多重PCR检测方法的建立与应用

作     者：胡宗云 杨培民 闫有利 HU Zongyun;YANG Peimin;YAN Youli

作者机构：辽宁省淡水水产科学研究院辽宁省水生动物病害防治重点实验室辽宁辽阳111000 

基　　金：财政部与农业农村部现代农业产业技术体系建设专项资金资助项目(CARS-45-34) 辽宁省农业科学院市厅级项目(2019DD279141) 营口市老边区淡水鱼省级科技特派团项目(2019JH5/10100022) 辽宁省淡水水产科学研究院优秀青年科技创新基金资助项目(DS-202001) 

出 版 物：《水产科学》 (Fisheries Science)

年 卷 期：2022年第41卷第4期

页      码：605-613页

摘      要：根据辽宁地区常见淡水鱼病原菌嗜水气单胞菌、迟钝爱德华氏菌、蜡样芽孢杆菌的相关毒力因子,选择特异性较强的嗜水气单胞菌的溶血素(hlyA)基因、迟钝爱德华氏菌的效应蛋白(eseD)基因、蜡样芽孢杆菌非溶血性肠毒素(nheA)基因为分子靶标,分别设计1对特异性引物,建立可同步检测3种菌的多重PCR检测体系。研究结果显示,在3个毒力基因引物浓度均为0.4μmol/L,模板质量浓度为2.5ng/μL,dNTP和酶添加量分别为2.5μL和0.3μL,退火温度为55℃时,各目的片段均可较好地扩增。敏感性试验结果表明,建立的多重PCR对嗜水气单胞菌、迟钝爱德华氏菌和蜡样芽孢杆菌的最低检测量分别为4.8、3.0ng和2.6ng。对临床分离的菌株样本进行检测,与16SrDNA分子鉴定结果的符合率为100%。建立的多重PCR体系检测方法特异、灵敏、快速,可同步完成淡水鱼源的嗜水气单胞菌、迟钝爱德华氏菌和蜡样芽孢杆菌的检测。

主 题 词：嗜水气单胞菌 迟钝爱德华氏菌 蜡样芽孢杆菌 多重PCR 

学科分类：0908[0908] 09[农学] 

D　O　I：10.16378/j.cnki.1003-1111.20244

馆 藏 号：203113508...