边界病病毒RT-PCR检测方法的建立和应用

作     者：毛立 张纹纹 李文良 杨蕾蕾 孙敏 程子龙 李基棕 郝飞 刘茂军 MAO Li;ZHANG Wenwen;LI Wenliang;YANG Leilei;SUN Min;CHENG Zilong;LI Jizong;HAO Fei;LIU Maojun

作者机构：江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31802196) 兽医生物技术国家重点实验室开放基金资助项目(SKLVBF202106) 亚夫科技服务资助项目(KF(21)2006) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2022年第42卷第9期

页      码：1786-1789,1816页

摘      要：边界病(border disease)由边界病病毒(border disease virus, BDV)引起,导致绵羊和山羊持续感染和繁殖疾病,2012年在国内首次报道,但目前尚无特异的RT-PCR方法对该病原进行检测。本研究通过比对黄病毒科瘟病毒属病毒的全基因组序列,以3′-UTR基因为靶基因,设计了特异扩增BDV的引物。通过构建重组质粒pMD18-T-BDV,以其作为标准品建立了BDV的RT-PCR检测方法。进一步优化该方法的反应条件,并进行特异性、敏感性及临床样品检测。结果显示,该方法在退火温度48~60℃时均可特异扩增BDV,通过检测牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)、牛病毒性腹泻病毒2型(BVDV-2)和猪瘟病毒(CSFV)提取的RNA,该方法可特异扩增BDV而对其他同属病毒检测均呈阴性,表明其特异性良好;同时,该方法具有良好的敏感性,最低检出限可达10~1拷贝/μL,敏感性极高。利用该方法检测BDV持续感染羊和人工感染羊,发现持续感染羊的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、淋巴结、卵巢、脑等器官均可检测到BDV,而人工感染羊只能在感染3~7 d的血液和淋巴结中检测到病毒RNA,其他器官中未检测到病毒。本研究建立了特异检测BDV的RT-PCR方法,并证明了BDV在持续感染羊和一过性感染羊中的病毒分布情况,为其可能的排毒途径提供了依据。

主 题 词：边界病病毒 RT-PCR检测方法 条件优化 应用 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2022.09.09

馆 藏 号：203113516...