黄酒酵母β-苯乙醇合成途径醇脱氢酶Ⅰ的异源表达及酶学特性

作     者：杨琪琳 刘双平 赵禹宗 孙海龙 毛健 Yang Qilin;Liu Shuangping;Zhao Yuzong;Sun Hailong;Mao Jian

作者机构：江南大学食品学院粮食发酵与食品生物制造国家工程研究中心江苏无锡214122 江南大学(绍兴)产业技术研究院浙江绍兴312000 国家黄酒工程技术研究中心浙江古越龙山绍兴酒股份有限公司浙江绍兴312000 江南大学江苏省生物活性制品加工工程技术研究中心江苏无锡214122 江南大学江苏省食品安全与质量控制协同创新中心江苏无锡214122 

基　　金：国家自然科学基金青年科学基金项目(32072205 31701593) 

出 版 物：《中国食品学报》 (Journal of Chinese Institute Of Food Science and Technology)

年 卷 期：2022年第22卷第6期

页      码：83-94页

摘      要：醇脱氢酶Ⅰ(Adh1p)是黄酒酵母艾利希途径最后合成β-苯乙醇的一个关键酶。为探究黄酒酵母Adh1p的差异及酶学特性,以工业生产菌株黄酒酵母HJ和模式菌株酿酒酵母S288C的基因组为模板,设计引物PCR扩增醇脱氢酶编码区基因ADH1,构建pET-28a(+)表达质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达获得Adh1p。通过超声破碎菌体后获取粗酶液,亲和层析纯化后获取纯酶,进而探究酶学特性。以苯乙醛为底物,酶活性测定表明:来自黄酒酵母的Adh1p^(HJ)纯酶的酶活(231.51 U/g)比来自酿酒酵母的Adh1p^(S288C)(203.48 U/g)高13.79%,且Adh1p^(HJ)的K_(m)值(0.524μmol/L)小于Adh1p^(S288C)的K_(m)值(0.759μmol/L),表现为Adh1p^(HJ)与底物的亲和力更大。从k_(cat)/K_(m)值发现Adh1p^(HJ)(0.406 L/(μmol·min))的催化效率更高。Adh1p^(HJ)耐受β-苯乙醇和乙醇的能力较高于Adh1p^(S288C)。本研究结果为Adh1p的结构以及酶学性质分析提供方法和理论依据,同时也对β-苯乙醇工业生产开发提供借鉴。

主 题 词：醇脱氢酶Ⅰ 异源表达 酶学性质 黄酒 黄酒酵母 

学科分类：0832[0832] 08[工学] 0836[0836] 082203[082203] 0822[工学-核工程类] 083203[083203] 

核心收录：

D　O　I：10.16429/j.1009-7848.2022.06.009

馆 藏 号：203113528...