重组酶介导等温扩增技术检测疟原虫方法的建立和评价

作     者：邵雷 赵松 刘燕红 应清界 杨坤 林红 SHAO Lei;ZHAO Song;LIU Yan-hong;YING Qing-jie;YANG Kun;LIN Hong

作者机构：江苏省血液中心江苏南京210042 国家卫生健康委员会寄生虫病预防与控制技术重点实验室江苏省寄生虫与媒介控制技术重点实验室江苏省血吸虫病防治研究所江苏无锡214064 江苏奇天基因生物有限公司江苏无锡214100 

基　　金：江苏省科技厅社会发展面上项目(No.BE2019755) 江苏省国际科技合作项目(No.BZ2020003) 

出 版 物：《中国热带医学》 (China Tropical Medicine)

年 卷 期：2022年第22卷第7期

页      码：617-622页

摘      要：目的 建立一种重组酶介导等温扩增技术(RAA)检测疟原虫的方法。方法 针对疟原虫属保守18S小亚基核糖体RNA(18S rRNA)基因设计特异性引物,筛选确定最佳引物对组合并建立疟原虫重组酶介导核酸等温扩增体系。通过该RAA体系检测疟原虫标准质粒、4种疟原虫[恶性疟原虫(Plasmodium falciparum, P.f)、间日疟原虫(P. vivax,P.v)、三日疟原虫(P. malaria, P.m)、卵形疟原虫(P. ovale, Po)]病原体以及其他6种输血传播寄生虫(婴儿利士曼原虫、杜氏利士曼原虫、刚地弓形虫、溶组织阿米巴虫、犬吉氏巴贝西虫、田鼠巴贝虫),以评估该体系的灵敏度和特异度。结果 筛选出一组扩增效果较好的引物对,整个RAA体系使用最佳引物对在37℃,20 min即可完成扩增,对标准质粒的检测下限为10-2copies/μL,恶性疟原虫、间日疟原虫和卵形疟原虫为102copies/μL,三日疟原虫为10 copies/μL。RAA检测体系未与其他输血传播寄生虫产生交叉反应,特异性良好。应用RAA方法检测外籍学生献血者标本,结果与荧光定量PCR结果一致。结论 成功建立了一种快速、简便和特异的疟原虫RAA检测方法,将会给血液筛查和一些基层偏远医院的临床检测提供很大帮助。

主 题 词：疟原虫 重组酶介导等温扩增 18S核糖体RNA 分子诊断 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13604/j.cnki.46-1064/r.2022.07.06

馆 藏 号：203113530...