高致病性猪繁殖与呼吸综合征RPA-LFD诊断方法的建立及初步应用

作     者：曾越琰 李超越 任玉鹏 张焕容 ZENG Yue-yan;LI Chao-yue;REN Yu-peng;ZHANG Huan-rong

作者机构：西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041 

基　　金：四川省应用基础项目(2021YJ0286) 

出 版 物：《西南民族大学学报（自然科学版）》 (Journal of Southwest Minzu University(Natural Science Edition))

年 卷 期：2022年第48卷第4期

页      码：379-385页

摘      要：高致病性猪繁殖与呼吸综合征(HP-PRRS)给我国养猪业带来了巨大的损失.为快速、便捷诊断该病,建立重组酶聚合酶扩增结合侧流层析技术(RPA-LFD)的HP-PRRS诊断方法.针对HP-PRRSV Nsp2基因特异序列,设计生物素(Biotin)标记的特异性引物和FAM荧光素标记的探针,对RPA-LFD的反应体系和条件进行优化,结果显示,HP-PRRSV RPA-LFD最佳反应体系为:上下游引物(0.42 pmol/μL)各2.1μL,探针(0.3 pmol/μL)0.6μL,Rehydration buffer 29.5μL,cDNA模板1μL,ddH_(2)O 12.2μL,MgOAc 2.5μL,共50μL;最佳反应条件为:37℃,20 min.该方法同时检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒VR2332株(PRRSV VR2332)和NADC30-like株等10种常见感染猪的病原,结果显示,该方法除对HP-PRRSV检测呈阳性外,对PRRSV VR2332株、NADC30-like和其它9种感染猪的病原检测均为阴性,特异性强;该方法对10倍系列稀释的质粒标准品检测结果显示,该方法对质粒标准品的最低检测限为4.05×10^(1)拷贝/μL,灵敏度高;该方法与HP-PRRSV商品化荧光检测试剂盒同时检测50份临床样品,二者符合率为100%.本研究首次建立了一种特异、灵敏、方便、快速、现场化的HP-PRRSV RPA-LFD检测方法,为HP-PRRS的快速诊断和流行病学调查提供了新的技术手段.

主 题 词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征 重组酶聚合酶扩增技术 侧流层析试纸条 即时检测 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.11920/xnmdzk.2022.04.004

馆 藏 号：203113535...