小鼠肺炎病毒RT-PCR方法的建立及在实验动物感染和国际比对样本检测中的应用

作     者：王吉 王莎莎 王淑菁 李威 秦骁 李晓波 付瑞 岳秉飞 贺争鸣 WANG Ji;WANG Shasha;WANG Shujing;LI Wei;QIN Xiao;LI Xiaobo;FU Rui;YUE Bingfei;HE Zhengming

作者机构：中国食品药品检定研究院国家实验动物微生物遗传检测中心北京102629 

基　　金：国家科技支撑计划(2015BAI09B02) 普通级封闭群裸鼹鼠种群的建立既乃低氧机制的初步研究 

出 版 物：《实验动物科学》 (Laboratory Animal Science)

年 卷 期：2022年第39卷第2期

页      码：1-10页

摘      要：目的建立小鼠肺炎病毒RT-PCR检测方法,用于实验动物及实验动物相关样本的检测。方法选择小鼠肺炎病毒(pneumonia virus of mice,PVM)G基因保守序列设计合成引物,建立RT-PCR方法,并进行方法的特异性、敏感性、重复性和稳定性验证。应用建立的方法对日常送检的27只小鼠、9只大鼠、5只沙鼠肺组织样本和19只PVM感染小鼠肺组织样本,及8份国际实验动物理事会(the International Council for Laboratory Animal Science,ICLAS)国际比对样本进行检测。结果建立的方法与仙台病毒、呼肠孤病毒Ⅲ型、汉坦病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒无交叉反应。能够检测PVM DNA最小模板浓度为8.77×10拷贝/μL,可检测病毒最小滴度为10/mL。用放置-30℃冰箱保存12个月的引物和PVM质粒进行PCR检测,仍能扩增到约249 bp的目的条带。用建立的方法检测日常送检的27只小鼠、9只大鼠、5只沙鼠肺组织样本,结果均为阴性;检测19只PVM感染小鼠肺组织样本,有7只小鼠肺组织样本结果阳性;检测8份ICLAS国际比对样本,有1份样本小鼠肺炎病毒核酸阳性,均符合预期结果。结论建立的PVM RT-PCR方法特异、敏感,重复性、稳定性好,能够用于小鼠、大鼠、沙鼠等实验动物的监测及其相关样本的检测。

主 题 词：小鼠肺炎病毒 RT-PCR 实验动物 应用 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071002[071002] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1006-6179.2022.02.001

馆 藏 号：203113548...