TUB2基因重组质粒的构建、鉴定及其在毛壳菌中的转化

作     者：迟玉杰 杨谦 

作者机构：哈尔滨工业大学生命科学与工程系哈尔滨150001 

基　　金：国家自然科学基金 ( 3940 0 0 87)资助项目 

出 版 物：《高技术通讯》 (Chinese High Technology Letters)

年 卷 期：2003年第13卷第2期

页      码：34-40页

摘      要：根据苯并咪唑类杀菌剂抗性基因的核酸序列 ,在其阅读框架外的上、下游设计一对特异性引物 ,并在其 5′ 端分别加上PstI位点。以pRB12 9质粒为模板 ,PCR扩增得到一条长约 1 4kb的片段 ,经酶切鉴定证明是TUB2基因。将此PCR产物经消化后与同样酶切的pTA质粒连接 ,构建出 pTA TUB2质粒并转化大肠杆菌。再以pTA TUB2质粒为模板 ,PCR扩增该目的基因 ,通过对其核苷酸序列分析证明构建的质粒是含TUB2基因的 pTA TUB2质粒。利用PEG方法 ,将该质粒转化毛壳菌 ,使得对多菌灵非常敏感的毛壳菌能够在 30 0 μg/ml多菌灵的培养基上正常生长 ,其抗药性提高 30 0倍以上 ,且转化稳定性试验表明 ,其抗药性在非选择性培养基上连续培养 10代保持不变。结果表明质粒pTA TUB2对毛壳菌的转化率为 2 7/ (2× 10 5)。

主 题 词：TUB2基因 鉴定 毛壳菌 转化 杀菌剂 基因工程 基因重组质粒 生物防治 抗苯并咪唑类基因 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1002-0470.2003.02.008

馆 藏 号：203113629...