猫α-synuclein蛋白的表达纯化及生物学特征分析

作     者：倪斌 张玲 李坚 张金喜 周健 杨可威 张君智 戴一鸣 夏雅琴 鲁燕华 刘俊平 李建峰 NI Bin;ZHANG Ling;LI Jian;ZHANG Jinxi;ZHOU Jian;YANG Kewei;ZHANG Junzhi;DAI Yiming;XIA Yaqin;LU Yanhua;LIU Junping;LI Jianfeng

作者机构：杭州师范大学医学院杭州311121 杭州市萧山区第四人民医院杭州311121 

基　　金：浙江省自然科学基金(LQ13C050001) 杭州师范大学科研启动基金(PE13002004003) 浙江省大学生科技创新活动计划暨新苗人才计划(ZX13005002028) 杭州师范大学2013-2014学年学生课外学术科技作品项目(1283XXM165)资助 

出 版 物：《北京生物医学工程》 (Beijing Biomedical Engineering)

年 卷 期：2015年第34卷第5期

页      码：458-461,508页

摘      要：目的对猫突触核蛋白（α-synuclein）进行克隆、表达及纯化,并探讨其生物信息学特征。方法在Genebank中α-synuclein基因的保守区域内设计引物,从猫脑c DNA文库中PCR扩增得到猫的α-synuclein基因,再将此基因双酶切后克隆到p ET28a原核表达载体中,构建重组质粒,测序正确的重组质粒转化BL21（DE3）大肠杆菌,采用IPTG诱导表达。然后对猫α-synuclein氨基酸的同源性和疏水性进行分析。结果实验成功从猫脑c DNA文库中扩增出α-synuclein基因,基因全长381个碱基,编码126个氨基酸。获得的全长基因成功克隆进入p ET28a,最后转染大肠杆菌BL21（DE3）,获得可溶性表达的α-synuclein蛋白质,蛋白质分子量为13.12k D,与预期分子量一致。生物信息学分析显示猫α-synuclein蛋白与人源及鼠源α-synuclein氨基酸具有很高的同源性,分别为87.35%和83.15%,但是与鼠和人的氨基酸序列比较,猫α-synuclein氨基酸缺失41～54位氨基酸。蛋白质结构预测显示猫α-synuclein具有很好的疏水性,有助于诱导表达时形成可溶性蛋白,这一结果在本研究中得到证实。结论本研究首次克隆了猫α-synuclein基因,并在大肠杆菌中实施了可溶性表达,为后期研究α-synuclein的进化、蛋白晶体结构、生物学功能和帕金森动物模型的构建奠定了一定的基础。

主 题 词：α-突触核蛋白 猫 帕金森病 克隆 原核表达 纯化 

学科分类：0831[工学-公安技术类] 08[工学] 0836[0836] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1002-3208.2015.05.04

馆 藏 号：203113980...