新型抗EGFR人源化抗体基因的构建和表达

作     者：孙思凡 靳彦文 李平 曹诚 张部昌 SUN Si-Fan;JIN Yan-Wen;LI Ping;CAO Cheng;ZHANG Bu-Chang

作者机构：安徽大学生命科学学院合肥230039 军事医学科学院生物工程研究所北京100850 

出 版 物：《军事医学科学院院刊》 (Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences)

年 卷 期：2009年第33卷第6期

页      码：526-530页

摘      要：目的:构建并表达进一步人源化且效果显著增强的抗EGFR抗体。方法:通过计算机辅助设计的结果,合成新型抗EGFR抗体的轻链和重链可变区序列,拼接成完整的轻链和重链基因并克隆入pIRES双表达载体。瞬时转染293T细胞,用rProteinA亲和层析柱从细胞培养上清中纯化抗体,并进行SDS-PAGE和免疫印迹鉴定。采用Biacore3000技术检测抗体结合抗原的能力;细胞侵袭实验初步检测抗体的功能。结果:成功构建3种不同突变体表达载体C2、C3和C5,纯化的抗体在还原SDS-PAGE中表现为相对分子质量约为25×103和50×103两条带;免疫印迹分析表明,该人源化抗体可与羊抗人IgG特异性结合。Biacore3000实验结果表明,C3抗体与抗原具有良好亲和活性(亲和力为6.13×10-10mol/L);细胞侵袭实验结果表明,C2和C3抗体对肿瘤细胞生长迁移均具有一定的抑制作用。结论:成功构建、表达了3种抗EGFR人源化抗体C2、C3和C5,其中C3具有良好的抗原结合能力和抑制肿瘤细胞生长迁移能力。

主 题 词：受体 表皮生长因子 人源化抗体 瞬时表达 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-9960.2009.06.007

馆 藏 号：203114081...