斑马鱼腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因短片段缺失突变体的构建与鉴定

作     者：张可 王小玉 黄淑莹 夏佳敏 黄四洲 Zhang Ke;Wang Xiaoyu;Huang Shuying;Xia Jiamin;Huang Sizhou

作者机构：成都医学院基础医学院成都610500 成都医学院发育与再生四川省重点实验室成都610500 成都医学院药学院成都610500 成都医学院基础医学院人体解剖与组织胚胎学教研室成都610500 

基　　金：国家自然科学基金(No:32070805) 四川省科技厅中央引导地方科技发展专项基金(No:2021ZYD0074) 四川省科技厅运用基础研究项目(No:2020YJ0384) 成都医学院研究生科研创新基金(No:YCX2021-12) 

出 版 物：《成都医学院学报》 (Journal of Chengdu Medical College)

年 卷 期：2022年第17卷第4期

页      码：416-420页

摘      要：目的构建斑马鱼腺苷甲硫氨酸脱羧酶(amd 1)突变体,并运用聚合酶链式反应(PCR)技术对突变的碱基位点设计特异性引物,以建立快速鉴定短片段缺失的方法。方法利用CRISPR/Cas9系统构建斑马鱼amd1突变体;运用整胚原位杂交技术分析AMD1在野生型(WT)和amd1纯合子斑马鱼胚胎中的表达;根据突变体的突变位点设计鉴定引物,用PCR和琼脂糖凝胶电泳检测,并使用二代测序技术验证。结果斑马鱼amd1突变体构建成功;受精后24 h,在WT斑马鱼胚胎中AMD1主要在头部、眼睛、体节及内胚层区域表达,而在amd1纯合子斑马鱼胚胎中AMD1的表达明显降低。运用amd 1-screen-(3)-5′引物进行PCR时,在WT斑马鱼胚胎中可获正常条带;而在amd 1纯合子斑马鱼胚胎中未能获得相应条带。结论斑马鱼amd1突变体被成功构建;amd 1-screen-(3)-5′被确定为最佳鉴定引物。

主 题 词：斑马鱼 腺苷甲硫氨酸脱羧酶 短片段缺失 突变体 快速鉴定 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071002[071002] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-2257.2022.04.002

馆 藏 号：203114089...